[发明专利]收集和使用胎盘脐血干细胞的方法

权利要求书

1.一种收集脐血干细胞的方法，包括：

提供离体的非放血的哺乳动物胎盘，该胎盘包含含有脐血干细胞的脐血；

用压力介导的灌注溶液的脉动流机械灌注所述离体的非放血的哺乳动物胎盘以产生灌注液，该灌注液包含含有脐血干细胞的脐血；

收集所述灌注液；和

从所述灌注液分离脐血干细胞以产生分离的脐血干细胞。

2.一种收集脐血干细胞的方法，包括：

提供离体的非放血哺乳动物胎盘，该胎盘包含含有脐血干细胞的脐血；

通过穿刺对所述的离体的非放血哺乳动物胎盘进行部分放血以获得部分放血的胎盘和一定体积的含有脐血干细胞的脐血；

用压力介导的灌注溶液的脉动流机械灌注所述部分放血的哺乳动物胎盘以产生灌注液，该灌注液包含含有脐血干细胞的脐血；

收集所述灌注液；和

从所述体积的脐血和所述灌注液分离脐血干细胞以产生分离的脐血干细胞；

其中所述体积的脐血和所述灌注液与单独的所述体积的脐血相比具有2倍至10倍提高的CD133+细胞的百分比。

3.如权利要求2所述的方法，进一步包括在分离前合并所述体积的脐血和所述灌注液。

4.如权利要求1或2所述的方法，其中灌注是在足以产生基本上无脐血干细胞的哺乳动物胎盘的条件下进行的。

5.如权利要求1或2所述的方法，其中灌注是使用蠕动泵进行的。

6.如权利要求1或2所述的方法，其中所述的分离的脐血干细胞包括造血干细胞。

7.如权利要求1或2所述的方法，进一步包括在提供步骤后冷却离体的哺乳动物胎盘以产生冷却的哺乳动物胎盘。

8.如权利要求7所述的方法，进一步包括：将所述冷却的离体哺乳动物胎盘保持在从大约＞0℃到大约15℃的温度下。

9.如权利要求8所述的方法，其中所述保持包括保持最多大约40小时的时间。

10.如权利要求1所述的方法，其中所述的离体胎盘在取得后、灌注前在冰上冷却或保存。

11.如权利要求8所述的方法，其中所述冷却的离体哺乳动物胎盘保持在从大约＞0℃到大约6℃范围的温度下。

12.如权利要求1或2所述的方法，其中所述方法在灌注之前不需要向胎盘中施用或注射抗凝血剂。

13.如权利要求1或2所述的方法，其中所述胎盘在灌注之前不施用或注射抗凝血剂。

14.如权利要求1或2所述的方法，其中所述灌注溶液包括包含抗凝血剂的生理相容溶液。

15.如权利要求14所述的方法，其中所述灌注溶液包含选自肝素、肌酸磷酸葡萄糖(CPDA)或其中两种或多种的任意组合的一种或多种抗凝血剂。

16.如权利要求2所述的方法，其中部分放血包括通过静脉穿刺或重力引流收集脐血。

17.如权利要求5所述的方法，其中灌注包括经由脐动脉和脐静脉中的一条或多条进行灌注。

18.如权利要求17所述的方法，其中灌注进一步包括向一条或多条脐动脉和脐静脉插管以获得插管的胎盘；和将插管的胎盘置于灌注回路中。

19.如权利要求18所述的方法，其中灌注是以大约15次搏动/分钟至大约60次搏动/分钟的脉冲设置进行的。

20.如权利要求18所述的方法，其中灌注是以大约60次搏动/分钟的脉冲设置进行的。

21.如权利要求19所述的方法，其中灌注是以大约30mmHg至大约70mmHg的收缩压进行的。

22.如权利要求21所述的方法，其中灌注进行时间为大约15分钟至大约35分钟。