[发明专利]对蜂房哈夫尼亚菌G5897，G5898，G5900特异的核苷酸及其应用

说明书

本发明涉及对蜂房哈夫尼亚菌G5897，G5898，G5900特异的核苷酸及其应用，所述核苷酸包括1）SEQ ID NO:1‑6所示的核苷酸中的一种。这些核苷酸可用于制备检测蜂房哈夫尼亚菌的PCR试剂盒和基因芯片。本发明是蜂房哈夫尼亚菌G5897，G5898，G5900特异的核苷酸及包含该核苷酸的PCR试剂盒、基因芯片，该技术操作方法简便，检测周期短，检测成本较低，准确性高，灵敏度高，易于产业化生产。

技术领域

本发明涉及对蜂房哈夫尼亚菌G5897，G5898，G5900特异的核苷酸，尤其涉及对蜂房哈夫尼亚菌G5897，G5898，G5900的O抗原基因簇中单个基因特异的核苷酸及其应用。

背景技术

蜂房哈夫尼亚菌（Hafnia alvei）为肠杆菌科中的一种，菌体呈直杆状，无荚膜，能动，兼性厌氧，有呼吸和发酵两种类型的代谢方式，在人类呼吸道、肠道，动物肠道和肉类奶制品等食物中较为为常见。蜂房哈夫尼亚菌是一种条件致病菌，该菌在免疫力低下的人群中可以引起菌血症，呼吸道感染，尿路感染及其他感染，它可能与肠胃炎有一定关系，此外，还可以导致蛋鸡的卡他性肠炎和肝脾肿大，保加利亚虹鳟鱼中动物流行性败血病等动物疾病。

细菌分型与鉴定方法主要有传统的表型方法、血清学方法以及分子鉴定方法。然而，随着分子生物学的发展，传统的血清分型和鉴定方法存在着一定的问题，如血清分型这种诊断方法需要大量的抗血清，而抗血清一般种类不全，数量不足，大量的抗血清在制备和储存中也存在一些困难。另一方面血清分型方法耗时长、灵敏度低、漏检率高、准确性差，不同的O抗原产生的抗血清之间经常存在交叉反应。因此，建立基于分子生物学技术的血清鉴定方法成为发展方向。

蜂房哈夫尼亚菌的表面抗原，既有O抗原也有H抗原，但是主要用O抗原进行分型，并且O抗原研究的比较透彻。目前已确定蜂房哈夫尼亚菌的正式血清型方案是由俄罗斯莫斯科研究疫苗和血清的梅契尼科夫研究所的一个实验室提出的，确认了39个O和36个H型。这种分类方法一直是研究菌株间流行病学关系的首选方法，并且在比对来自不同地方不同时间的菌株方面尤为有用。对于其分子鉴定也越来越受到人们的重视，分子生物学检测技术具有速度快且易于大规模使用的优点，是目前国际上公认的致病菌检测的发展方向。

近年来，越来越多的分子技术用于病原菌的分型、鉴定、检测及病害诊断，包括转录间隔区(ITS)序列分析、随机扩增长度多态性(RAPD)分析、核糖体DNA限制性片段长度多态性(RFLP)分析等。分子生物学方法不仅可用于蜂房哈夫尼亚菌的快速血清分型筛查，稳定的鉴定结果可以弥补表型特征鉴定方法的不足。和传统检测技术相比，这些基于多聚酶链式反应(PCR)的分子检测技术，不需要经过病原菌的分离、纯培养等过程，而且具有快速、灵敏、特异性强等优点。

聚合酶链式反应技术(Polymerase chain reaction,简称PCR技术)作为微生物检测技术目前正在得到认同和推广，该技术相对于传统的方法有高通量、检测速度快、特异性强、灵敏度高等优点，只需对样品进行简单的增菌过程，再通过离心及裂解制备细菌DNA模板，就可以在高特异性引物介导下的PCR过程中扩增目标序列，达到检测样品中是否含有待测的致病性微生物的目的。PCR的扩增过程仅需1.5小时。这对检验检疫部门和临床检验无疑是极大提高了工作速度，同时也降低了工作成本。

发明内容

本发明的目的在于提供了本发明涉及对蜂房哈夫尼亚菌G5897，G5898，G5900特异的核苷酸，其特征在于所述的核苷酸具有：

1）SEQ ID NO:1-6所示的核苷酸中的一种；

2）与SEQ ID NO:1-6所示的核苷酸互补的核苷酸中的一种；所述的SEQ ID NO:1-6如下：