[发明专利]一种内皮细胞培养基及内皮细胞的培养方法

说明书

本发明提供了一种内皮细胞培养基和内皮细胞的培养方法，该内皮细胞培养基包括无血清基础培养基、胰岛素、转铁蛋白、维生素C、牛血清白蛋白、碱性成纤维生长因子、血管内皮生长因子、干细胞生长因子、层粘连蛋白、表皮生长因子、非必须氨基酸和二甲双胍盐酸盐。本发明提供的内皮细胞培养基在上述组分的配伍下能够提高内皮细胞的增殖能力。另外，本发明提供的内皮细胞培养基还能提高内皮细胞的成血管能力。实验结果表明：本发明提供的内皮细胞培养基培养内皮细胞至P10代时，细胞依然生长旺盛；P10代内皮细胞表型CD309和CD31双阳性表达高达97.2％。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种内皮细胞培养基及内皮细胞的培养方法。

背景技术

血管内皮细胞又称内皮细胞，通常指衬于心、血管和淋巴管内表面的单层扁平上皮，它形成血管的内壁。内皮细胞是分布在脑、淋巴结、肺、肝脏、脾脏等等器官组织中的一些有共同特点的吞噬细胞的总称，他们吞噬异物、细菌、坏死和衰老的组织，还参与集体免疫活动，包括：1、血管收缩及血管舒张，从而控制血压；2、凝血(血栓形成及纤维蛋白溶解)；3、动脉硬化；4、血管生成；5、炎症及肿胀(如：浮肿)。6、内皮细胞亦控制一些物质，如白血球进出血管。血管内皮细胞最为重要的一个功能就是参与血管的形成，而在众多心血管疾病、糖尿病及其他原因引起的血管器质性病变中，很多情况下都是由于血管内皮细胞凋亡、坏死或是不再增殖引起的。因此血管内皮细胞就成为了现在很多研究的热点，这些研究以及实验往往需要用到大量的血管内皮细胞。

现有技术中，采用M199基础培养基和10％胎牛血清作为培养基培养内皮细胞。然而此培养基培养的内皮细胞的增殖能力较差。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种内皮细胞培养基，本发明提供的内皮细胞培养基能够提高内皮细胞的增殖能力。

本发明提供了一种内皮细胞培养基，包括无血清基础培养基、胰岛素、转铁蛋白、维生素C、牛血清白蛋白、碱性成纤维生长因子、血管内皮生长因子、干细胞生长因子、层粘连蛋白、表皮生长因子、非必须氨基酸和二甲双胍盐酸盐。

优选地，包括转铁蛋白3～23μg/mL；层粘连蛋白10～35ng/mL和牛血清白蛋白8～33μg/mL。

优选地，包括胰岛素0.4～1.8mg/mL；维生素C 8～30μg/mL；非必须氨基酸33～68ng/mL和二甲双胍盐酸盐8～33mmol/L。

优选地，包括碱性成纤维生长因子4～18ng/mL；血管内皮生长因子8～30ng/mL；干细胞生长因子6～28ng/mL和表皮生长因子6～14ng/mL。

优选地，所述无血清基础培养基包括IMDM无血清基础培养基。

优选地，包括无血清基础培养基和以下组分：

胰岛素0.5～1.5mg/mL；转铁蛋白5～20μg/mL；维生素C 9～28μg/mL；牛血清白蛋白10～30μg/mL；碱性成纤维生长因子5～15ng/mL；血管内皮生长因子10～28ng/mL；干细胞生长因子8～25ng/mL；层粘连蛋白12～34ng/mL；表皮生长因子8～12ng/mL；非必须氨基酸35～65ng/mL和二甲双胍盐酸盐10～30mmol/L。

本发明提供了一种内皮细胞的培养方法，包括以下步骤：

将脐带血分离，得到白膜层细胞；

将所述白膜层细胞接种于上述技术方案所述的内皮细胞培养基中，经培养获得P1代内皮细胞。

优选地，所述接种的密度为4.5×10⁵～5.5×10⁵个/mL。

优选地，所述培养的条件为：温度为35℃，CO₂体积浓度5％。