[发明专利]一种生产羊抗人C反应蛋白抗血清的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种生产羊抗人C反应蛋白抗血清的方法，属于抗血清制备技术领域。

背景技术

C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)是指在机体受到感染或组织损伤时血浆中一些急剧上升的蛋白质，CRP可以激活补体和加强吞噬细胞的吞噬功能，从而清除入侵机体的病原微生物和损伤、坏死、凋亡的组织细胞，在机体的天然免疫过程中发挥重要的保护作用。其分子量为105KD。

CRP是第一个被认为是急性时相反应蛋白，正常情况下含量极微量，在急性创伤和感染时其在血浆中浓度急剧升高，CRP是临床上最常用的急性时相反应指标。血浆中CRP浓度在急性心肌梗死、创伤、感染、炎症、外科手术、癌细胞浸润时迅速显著地增高，可达正常水平的2000倍。监测血浆CRP浓度，并结合临床病史，有助于病程随访，特别在炎症过程中，随访风湿病、系统性红斑狼疮、白血病等。

将人CRP抗原与佐剂乳化后，按一定的程序免疫动物，可在动物血清中产生抗人的CRP抗体。虽然目前的生产方法都可以产生一定量的抗体，但是抗体产生速度慢，水平较低，且抗原用量高。

发明内容

发明目的：为了克服现有技术中存在的不足，本发明提供了一种生产羊抗人C反应蛋白抗血清的方法。

技术方案：为实现上述目的，本发明提供了一种生产羊抗人C反应蛋白抗血清的方法，包括以下步骤：

(1)抗原准备：选用人C反应蛋白抗原，注射前以弗氏佐剂进行乳化得抗原乳剂；

(2)第一次注射：使用上述抗原乳剂对羊进行注射，注射部位为足底、腹股沟、腋部、颈部、背部皮下多点注射，每个部位1-2点，共计10-16点；

(3)第二次注射：第一次注射后20天进行第二次注射，注射部位为淋巴结内、腹股沟、腋部、颈部、背部皮下多点注射，每个部位1-2点，共计10-16点；

(4)第三次注射：第二次注射后9-11天进行第三次注射，注射部位为腹股沟、腋部、颈部、背部皮下多点注射，每个部位1-2点，共计8-16点；

(5)第四次注射：第三次注射后9-11天进行第四次注射，注射部位为腹股沟、腋部、颈部、背部皮下多点注射，每个部位1-2点，共计8-16点；

(6)第五次注射：第四次注射后9-11天进行第五次注射，注射部位为腹股沟、腋部、颈部、背部皮下多点注射，每个部位1-2点，共计8-16点；

(7)血清效价检测：每次注射后8-10天采血，分离血清，检测其双扩效价。

作为优选，所述第一次注射前乳化用的弗氏佐剂为完全弗氏佐剂，第二次、第三次、第四次和第五次注射前乳化用的弗氏佐剂为不完全弗氏佐剂。

作为另一种优选，所述第一次注射的剂量为每只羊共计0.5mg抗原，每一针剂量平均分配。

作为另一种优选，所述第二次注射的剂量为每只羊共计1.0mg抗原，每一针剂量平均分配。

作为另一种优选，所述第三次、第四次和第五次注射的剂量均为每只羊共计2.0mg抗原，每一针剂量平均分配。

作为另一种优选，所述血清效价检测的方法为双扩免疫法。

作为另一种优选，所述羊为山羊或者绵羊。

本发明中完全弗氏佐剂含结核分枝杆菌的细胞壁成分，可刺激致敏淋巴细胞的分裂和浆细胞产生抗体，引起淋巴结的肿大，加强对抗原的抗体反应。

此外，本发明通过特定抗原剂量、免疫时间、注射部位和注射次数，对羊进行免疫，最终得到较高的抗体水平。本发明重点是开始三次免疫中每只羊注射的抗原剂量成倍增加，以逐渐增强抗原对机体的刺激。

有益效果：相对于现有技术，本发明生产羊抗人C反应蛋白抗血清的方法，成本低，过程简单，不仅能稳定生产抗体，并且产生抗体速度快，抗体水平高，抗原用量小。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作更进一步的说明。

实施例1

选择5只成年健康山羊，进行下列步骤：

(1)抗原准备：选用人C反应蛋白抗原，注射前以弗氏佐剂进行乳化得抗原乳剂；

(2)第一次注射：取2.5mg人C反应蛋白抗原，用PBS或生理盐水稀释至5ml，再加入5ml完全弗氏佐剂制成抗原乳剂，使用此抗原乳剂对羊进行注射，注射部位为足底、腹股沟、腋部、颈部、背部皮下多点注射，每个部位1-2点，共计10-16点，每只羊注射剂量为2ml含0.5mg抗原，每一针剂量平均分配；