[发明专利]一种生产羊抗人视黄醇结合蛋白抗血清的方法在审
申请号: | 201510474314.X | 申请日: | 2015-08-05 |
公开(公告)号: | CN104987418A | 公开(公告)日: | 2015-10-21 |
发明(设计)人: | 张传明;袁金城;徐志伟 | 申请(专利权)人: | 海奥斯生物科技镇江有限公司 |
主分类号: | C07K16/18 | 分类号: | C07K16/18;C07K16/06 |
代理公司: | 南京苏高专利商标事务所(普通合伙) 32204 | 代理人: | 许丹丹 |
地址: | 212446 江苏省镇*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 生产 羊抗人视黄醇 结合 蛋白 血清 方法 | ||
技术领域
本发明涉及一种生产羊抗人视黄醇结合蛋白抗血清的方法,属于抗血清制备技术领域。
背景技术
视黄醇结合蛋白(Retinol-Binding Protein,RBP)是血液中维生素的转运蛋白,由肝脏合成、广泛分布于血液、脑脊液、尿液及其他体液中。测定视黄醇结合蛋白能早期发现肾小管的功能损害,并能灵敏反映肾近曲小管的损害程度,还可作为肝功能早期损害和监护治疗的指标。其分子量为21KD。
目前,将人RBP抗原与佐剂乳化后,按一定的程序免疫动物,可在动物血清中产生抗人的RBP抗体。虽然目前的生产方法都可以产生一定量的抗体,但是抗体产生速度慢,水平较低,且抗原用量高。
发明内容
发明目的:为了克服现有技术中存在的不足,本发明提供了一种生产羊抗人视黄醇结合蛋白抗血清的方法。
技术方案:为实现上述目的,本发明提供了一种生产羊抗人视黄醇结合蛋白抗血清的方法,包括以下步骤:
(1)抗原准备:选用人视黄醇结合蛋白抗原,注射前以弗氏佐剂进行乳化得抗原乳剂;
(2)第一次注射:使用上述抗原乳剂对羊进行注射,注射部位为足底、腹股沟、腋部、颈部、背部皮下多点注射,每个部位1-2点,共计10-16点;
(3)第二次注射:第一次注射后20天进行第二次注射,注射部位为淋巴结内、腹股沟、腋部、颈部、背部皮下多点注射,每个部位1-2点,共计10-16点;
(4)第三次注射:第二次注射后9-11天进行第三次注射,注射部位为腹股沟、腋部、颈部、背部皮下多点注射,每个部位1-2点,共计8-16点;
(5)第四次注射:第三次注射后9-11天进行第四次注射,注射部位为腹股沟、腋部、颈部、背部皮下多点注射,每个部位1-2点,共计8-16点;
(6)第五次注射:第四次注射后9-11天进行第五次注射,注射部位为腹股沟、腋部、颈部、背部皮下多点注射,每个部位1-2点,共计8-16点;
(7)第六次注射:第五次注射后9-11天进行第六次注射,注射部位为腹股沟、腋部、颈部、背部皮下多点注射,每个部位1-2点,共计8-16点;
(8)第七次注射:第六次注射后9-11天进行第七次注射,注射部位为腹股沟、腋部、颈部、背部皮下多点注射,每个部位1-2点,共计8-16点;
(9)第八次注射:第七次注射后9-11天进行第八次注射,注射部位为腹股沟、腋部、颈部、背部皮下多点注射,每个部位1-2点,共计8-16点;
(10)血清效价检测:每次注射后8-10天采血,分离血清,检测其双扩效价。
作为优选,所述第一次注射前乳化用的弗氏佐剂为完全弗氏佐剂,第二次、第三次、第四次、第五次、第六次、第七次和第八次注射前乳化用的弗氏佐剂为不完全弗氏佐剂。
作为另一种优选,所述第一次注射的剂量为每只羊共计0.5mg抗原,每一针剂量平均分配。
作为另一种优选,所述第二次注射的剂量为每只羊共计1.0mg抗原,每一针剂量平均分配。
作为另一种优选,所述第三次、第四次、第五次、第六次、第七次和第八次注射的剂量均为每只羊共计2.0mg抗原,每一针剂量平均分配。
作为另一种优选,所述血清效价检测的方法为双扩免疫法。
作为另一种优选,所述羊为山羊或者绵羊。
本发明中弗氏完全佐剂含结核分枝杆菌的细胞壁成分,可刺激致敏淋巴细胞的分裂和浆细胞产生抗体,引起淋巴结的肿大,加强对抗原的抗体反应。
此外,本发明通过特定抗原剂量、免疫时间、注射部位和注射次数,对羊进行免疫,最终得到较高的抗体水平。本发明重点是开始三次免疫中每只羊注射的抗原剂量成倍增加,以逐渐增强抗原对机体的刺激。
有益效果:相对于现有技术,本发明生产羊抗人视黄醇结合蛋白抗血清的方法,成本低,过程简单,不仅能稳定生产抗体,并且产生抗体速度快,抗体水平高,抗原用量小。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作更进一步的说明。
实施例1
选择5只成年健康山羊,进行下列步骤:
(1)抗原准备:选用含有人视黄醇结合蛋白抗原,注射前以弗氏佐剂进行乳化得抗原乳剂;
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