[发明专利]适用于免疫细胞大规模培养的无血清培养基

说明书

本发明公开了适用于免疫细胞大规模培养的无血清培养基，属于细胞生物学与医学免疫学领域。所述无血清培养基以RPMI1640培养基为基础，还含有添加成分，所述添加成分为羟乙基哌嗪硫磺酸、酚红·钠、L‑谷氨酸盐、碳酸氢钠，还可以添加胰岛素、转铁蛋白、硒、人血白蛋白、白介素‑2。本发明所含成分均为化学限定成分，不含任何动物血清成分，适用于对所有免疫细胞进行大规模培养、临床安全性高，且增殖效果更好。

技术领域

本发明属于细胞生物学与医学免疫学领域，具体涉及一种适用于所有免疫细胞培养的无血清培养基。

背景技术

随着免疫细胞生物学及免疫分子生物学的高速发展，体细胞免疫治疗已成为肿瘤患者放、化疗后辅助治疗的重要手段之一，其对于促进患者免疫系统的重建、消除残留病灶及骨髓净化都具有良好效果。

体细胞免疫治疗，是向肿瘤患者输入具有抗肿瘤活性的免疫细胞，直接杀伤肿瘤或激发机体抗肿瘤免疫反应，从而达到治疗效果的生物疗法。体外操作包括细胞在体外的传代、扩增、修饰、筛选及经药物或其他能改变细胞生物学行为的处理。经体外操作后的体细胞可用于肿瘤治疗，也可用于肿瘤预防。

自体细胞免疫疗法，主要包括树突状细胞疫苗(DC)、CIK、DC刺激的CIK细胞(DC-CIK)、自然杀伤细胞(NK)、NKT细胞等。具体方法是：通过提取患者体内不通过提取患者体内不成熟的免疫细胞(采血)，在实验室中进行活化培养使其具有高效识别和杀灭肿瘤细胞的能力后，再回输患者体内。患者只需配合做采血与回输血两个步骤。

目前，血清仍是免疫细胞培养中最基本的的添加物，尤其是在细胞生长状况不良时，常常会先使用有血清的培养液进行培养，待细胞生长旺盛以后，再换成无血清培养液。无血清培养基和试剂被广泛的应用于培养哺乳动物和无脊椎动物细胞，以制备单克隆抗体，病毒抗原和重组蛋白等。然而，由于动物血清中含有动物成分，且成分复杂，虽含很多对细胞有利的成分，也含有对细胞有害的成分，如多胺氧化酶等，若其用于临床细胞治疗体系中，可能会导致一些潜在的风险。而且在大规模生产中，血清来源越来越困难，价格昂贵，是构成动物细胞培养对生产成本的主要部分之一。在此背景下，急需一种安全有效的免疫细胞无血清培养基来提高临床免疫细胞培养的安全性及有效性。

目前，使用最广泛的无血清培养基主要是LONZA的X VIVO无血清培养基和GIBCO的AIM无血清培养基，但是上述两种培养基均需在细胞培养前期补充自体血浆，否则培养免疫细胞时，难以达到临床的回输标准，且培养时间均较长。

发明内容

针对上述现有的无血清培养基的缺陷，本发明提供了一种适用于培养免疫细胞大规模培养的无血清培养基。本发明的目的在于克服现有技术的缺点，提供了一种适用于免疫细胞大规模培养的无血清培养基。本发明制备的无血清培养基可应用于所有免疫细胞的培养，不需要肿瘤细胞的刺激，不需要补加胎牛血清，提高了临床安全性。且运用本发明的无血清培养基培养免疫细胞时，增殖效果更好，培养时间更短，同时也大大地降低了生产成本。

为达到上述目的，本发明采用了下述技术方案：

一种适用于免疫细胞大规模培养的无血清培养基，以RPMI 1640培养基为基础，还含有添加成分，所述添加成分为羟乙基哌嗪硫磺酸、酚红·钠、L-谷氨酸盐、碳酸氢钠。

优选的，所述添加成分的浓度为：羟乙基哌嗪硫磺酸3-9/L、酚红·钠0.0001-0.1g/L、 L-谷氨酸盐0.1-1g/L、碳酸氢钠0.5-8g/L。

进一步优选的，所述添加成分的浓度为：羟乙基哌嗪硫磺酸5-7g/L、酚红·钠0.002-0.01 g/L、L-谷氨酸盐0.2-0.6g/L、碳酸氢钠1-5g/L。

进一步优选的，所述添加成分的浓度为：羟乙基哌嗪硫磺酸5.958g/L、酚红·钠0.0053 g/L、L-谷氨酸盐0.4g/L、碳酸氢钠3g/L。