[发明专利]一种用于萃取磷酸肽的管内固相微萃取复合物柱的制备方法

权利要求书

1.一种管内固相微萃取复合物柱的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1) 二氧化钛-石墨烯氧化物复合物的制备：

将一定浓度的石墨烯氧化物水溶液滴加至甲基丙烯酰氧乙基三甲基氯化铵水溶液中，充分搅拌后离心、洗涤，再分散超纯水中，滴入一定浓度纳米二氧化钛浆液，搅拌7-14 h后离心、洗涤、干燥；

(2)管内固相微萃取柱的制备：

将由单体、交联剂、引发剂、致孔剂及步骤（1）中制备的二氧化钛-石墨烯氧化物复合物组成的溶液注入到硅烷化的毛细管中，在紫外反应箱中光聚5-30 min；其中单体是甲基丙烯酸丁酯，交联剂是乙二醇二甲基丙烯酸酯，引发剂是2,2-二甲氧基-苯基苯乙酮，致孔剂由正丙醇、1,4-丁二醇和水组成三元致孔剂，硅烷化的毛细管所用的硅烷化试剂为3-( 三甲氧基甲硅基) 甲基丙烯酸丙酯；

上述制备过程中，甲基丙烯酰氧乙基三甲基氯化铵作为桥梁，不仅通过π-π堆叠作用与石墨烯氧化物结合，通过静电作用与二氧化钛结合，而且其具有的甲基丙烯结构能够与单体、交联剂溶液聚合，使二氧化钛复合物生长在整体柱结构中；

步骤（1）二氧化钛与石墨烯氧化物质量比为1:（1-3.5），二氧化钛与META的比为1:（1-5）。

2.按照权利要求1的一种管内固相微萃取复合物柱的制备方法，其特征在于，步骤（2）单体、交联剂、引发剂、致孔剂的质量比为60:40:1:144。

3.按照权利要求1的一种用于萃取磷酸肽的管内固相微萃取复合物柱的制备方法，其特征在于，致孔剂中正丙醇、1,4-丁二醇和水的体积百分含量为50-70%，20-40%，10%。

4.按照权利要求1-3的任一方法制备得到的管内固相微萃取复合物柱。

5.按照权利要求1-3的任一方法制备得到的管内固相微萃取复合物柱用于对微量甚至痕量磷酸肽的富集或检测。

6.按照权利要求1-3的任一方法制备得到的管内固相微萃取复合物柱用于对微量甚至痕量磷酸肽的萃取和解析的方法，其特征在于：

磷酸肽样品的管内固相微萃取：

在200 psi-500 psi压力驱动下，使配制的单磷酸肽样品乙酸溶液流经制备的管内固相微萃取柱，分析物与萃取相结合留在萃取柱中，用离心管收集萃取柱末端溶液；

磷酸肽样品的解析：

在200 psi-500 psi压力驱动下，使解析液流经萃取柱进行解析；萃取物从萃取相洗脱下来，用离心管收集萃取柱末端溶液；

乙酸溶液pH=3-4，体积百分比0.1%；解析液为pH=9-11，0.01%-1%（v/v）的氨水。

7.权利要求6的方法所得的萃取液与解析液的分析方法，其特征在于磷酸肽样品的紫外检测： 离线模式下，利用压力驱动进样，对萃取液、解析液分别进行紫外检测，紫外检测波长设定为214 nm，检测用毛细管内径为10 μm-25 μm，进样时间3 s-6 s，流动相为超纯水。