[发明专利]一种短距槽舌兰快速繁殖方法

权利要求书

1.一种短距槽舌兰的快速繁殖方法，其特征在于经过下列各步骤：

（1）种子萌发：以生长健壮、无病虫害的植株为母株，按常规对短距槽舌兰进行人工授粉，授粉120天后，将蒴果成熟、无病、未破裂的完整果实进行常规灭菌后，切开果实取出种子，将种子接种于下列诱导萌发培养基中：Ms＋0.03～0.05mg/L 6-BA＋10～15%体积比的椰乳＋80～100g/L的新鲜香蕉泥+30～35g/L的土豆泥＋花宝1号1～3g/L+3～5g/L的活性炭＋30g/L的蔗糖+6%质量比的琼脂，pH值为5.2～5.4，并进行暗培养至种子萌发，转入温度为22～24℃、光照时间为2～3小时/天、光照强度为1000lx的条件下培养30天，得到幼胚；

（2）原球茎的诱导：将步骤（1）所得幼胚转接到下列液体培养基中：1/2Ms+0.03～0.05mg/L的6-BA +0.1～0.3mg/L的TDZ+体积浓度10～15%的椰乳+80～100g/L的新鲜香蕉泥+50～55g/L的土豆泥+2～4g/L花宝1号+3～5g/L活性炭+30g/L的蔗糖，pH值为5.2～5.4；并在温度为22～24℃、光照时间为8～10小时/天、光照强度为1000lx、转速为120r/min的条件下进行摇床下培养35天，且每10天更换一次新的上述液体培养基，之后用无菌筛网过滤后，得诱导后的体细胞胚；

（3）分化培养：将步骤（2）诱导出的体细胞胚转接到下列液体分化培养基上：1/4Ms+0.5～1.0mg/L的6-BA+0.1～0.3mg/L的NAA+体积浓度10～15%的椰乳+80～85g/L的新鲜香蕉+50g/L的土豆泥+2～3g/L花宝1号+1～3g/L花宝2号+3～5g/L的活性炭+30g/L的蔗糖+6%质量比的琼脂，pH值为5.2～5.4；并在温度为22～24℃、光照时间为8～10小时/天、光照强度为2000lx的条件下培养90～120天，每20天更换一次新的上述液体分化培养基，直至培养出的膨大原球茎上分化出短距槽舌兰小苗；

（4）壮苗培养：切下步骤（3）的短距槽舌兰小苗，放置于下列壮苗培养基上：1/4Ms+0.5～1.0mg/L的6-BA+0.3～0.5mg/L的NAA+体积浓度10～15%的椰乳+80～85g/L的新鲜香蕉+50～55g/L的土豆泥+1～3g/L花宝1号+3～5g/L花宝2号+3～5g/L活性炭+30g/L的蔗糖，pH值为5.2～5.4；并在温度为22～24℃、光照时间为8～10小时/天、光照强度为2000lx的条件下培养，直至短距槽舌兰小苗长至2cm以上的高度，并具有2片及2片以上伸长叶片，即得壮苗；

（5）生根培养：从步骤（4）的壮苗基部黄褐色部位切下苗段，转接到下列生根培养基上：1/4Ms+0.1～0.3mg/L的6-BA+1.0～3.0mg/L的NAA+体积浓度10～15%的椰乳+100～120g/L的新鲜香蕉+50～55g/L的土豆泥+3～5g/L的活性炭+30g/L的蔗糖+6%质量比的琼脂，pH值为5.2～5.4；并在温度为22～24℃、光照时间为8～10小时/天、光照强度为2000lx的条件下培养，直至壮苗高度达4～5cm，具有2片以上叶片，且根长3cm以上，即得生根植株；

（6）炼苗移栽：每年进入3月后，将步骤（5）所得生根植株置于自然光下，在遮阴度为30%的条件下炼苗7～10天，然后洗净生根植株，将生根植株整株捆绑至潮湿树皮上，生根植株的基部包裹苔藓，保持基部的水分为80%，空气湿度为90%以上，并通风，即得炼苗后的组培短距槽舌兰，按常规移栽至树皮和兰石按3:1混合所得的基质中，即完成短距槽舌兰的快速繁殖。

2.根据权利要求1所述的快速繁殖方法，其特征在于：所述步骤（1）的人工授粉是在每年的5～6月份，即短距槽舌兰开花的季节，待开花后5～7天，选取健康无病植株于晴朗无雨的上午10～12点进行授粉自交，自交前1天及自交后1天不对植株进行水喷淋。

3.根据权利要求1所述的快速繁殖方法，其特征在于：所述步骤（1）的常规灭菌是将短距槽舌兰的蒴果经流水冲洗30min后，用体积浓度为70%的酒精擦拭蒴果表面，然后依次用无菌水洗涤3次、用质量浓度为0.1%的升汞灭菌10min、无菌水洗涤3次，再用质量浓度为10%的次氯酸钠浸泡10min，最后用无菌水洗涤3次，吸干蒴果表面的水分。

4.根据权利要求1所述的快速繁殖方法，其特征在于：所述步骤（6）的洗净生根植株是用1/1000倍的多菌灵浸泡生根植株的全株10分钟。