[发明专利]同时扩增人常染色体和Y染色体STR基因座的荧光标记复合扩增试剂盒及其应用

说明书

技术领域

本发明属于分子遗传学领域，涉及人类常染色体和Y染色体STR基因座的复合扩增检验系统，具体涉及一种同时扩增人常染色体和Y染色体STR基因座的荧光标记复合扩增试剂盒，可应用于法医个体识别、嫌疑人家系排查及亲权鉴定等方面。

背景技术

短串联重复序列(Short Tandem Repeat，STR)是存在于人基因组中的一类具有长度多态性的DNA序列，其核心序列一般由2～6个碱基构成，因该核心序列在不同个体间呈不同数目的串联重复而呈现出长度多态性。人基因组DNA中平均每6～10kb就有一个STR基因座，这些广泛分布于人基因组中高度多态重复序列成为个体识别和亲权鉴定的有效遗传标记，可用聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction，PCR)和电泳分离的方法进行检测。

DNA-STR分型技术由于具有特异性好，灵敏度高，分型简便快速，易于标准化等优点，自20世纪90年代以来已成为法医物证检验的主要手段之一。目前常用的STR检测试剂盒包括常染色体STR检测试剂盒和Y染色体STR检测试剂盒，可以分别进行个体识别检测和父系检测。当一个重大刑事案件发生时，往往会对现场提取的物证先进行常染色体STR检测，当确认为男性犯罪嫌疑人遗留的物证时，再加做Y染色体STR检测，由此增加侦查线索。目前国内使用最多的ABI公司生产的Y染色体STR试剂盒(Yfiler)和常染色体STR试剂盒(Identifiler)因受到检材状态、扩增位点个数、扩增体系等因素的影响，仅两次PCR过程就耗时5-6个小时，这样两次的检验程序往往因为增加了检测时间而延误抓获犯罪嫌疑人的最佳机会，同时也会因为犯罪嫌疑人遗留在现场的物证量少导致检测失败，最终失去侦查线索。总而言之，随着刑事案件的增多，现有检测试剂盒已无法很好的满足公安实战对于法医DNA的快速检验和现场检验能力的要求，如何实现常染色体STR基因座和Y染色体STR基因座一起检测，达到缩短检测时间同时提高排除和确定犯罪嫌疑人的效率成为有待解决的问题。

本发明利用高效的热启动Taq DNA聚合酶及多色荧光技术，可以单管同时扩增34个基因座，最终研发常染色体STR基因座和Y染色体STR基因座同时检测的综合试剂盒，为满足公安实战对于法医DNA的快速检验和现场检验能力的要求提供有效的技术保障。

发明内容

本发明的目的在于提供一种同时扩增人常染色体和Y染色体STR基因座的荧光标记复合扩增试剂盒及其应用，达到缩短检测时间，提高排除和确定犯罪嫌疑人的效率。

本发明为实现上述目的，采用如下技术方案实现：

通过对DYS549、DYS522、DYS389I、DYS439、DYS447、DYS389II、DYS392、DYS576、DYS19、DYS388、DYS391、DYS635、DYS460、DYS456、DYS533、DYS520、DYS438、DYS527a/b、DYS449、DYS709、DYS622、DYS481、DYS437、DYS390、DYS630、DYS448、Y_GATA_H4、DYS458、DYS607、DYS393、DYS552、DYS570、DYS385a/b、DYS593、DYS444、DYS643、Amelogenin、vWA、D10S1248、D2S441、D21S11、D18S51、D5S818、D7S820、D13S317、D16S539、FGA、D2S1338、D22S1045、D1S1656、D19S433、D6S1043、D12S391、D8S1179、D3S1358、CSF1PO、Penta D、Penta E、TH01和TPOX共62个基因座的研究，确保所选基因座与市场主流试剂盒(ABI公司的Identifiler和Yfiler)的基因座具有一定兼容性，即可以与已有DNA数据进行共享与交流，最后筛选出18个Y染色体STR基因座、15个常染色体STR基因座和Amelogenin基因座，筛选出的基因座如下：

D3S1358、D13S317、D7S820、D16S539、TPOX、TH01、D2S1338、CSF1PO、D19S433、vWA、D5S818、FGA、D8S1179、D21S11、D18S51、Amelogenin、DYS19、DYS385a/b、DYS389Ⅰ、DYS389Ⅱ、DYS390、DYS391、DYS392、DYS393、DYS438、DYS439、DYS456、DYS458、DYS635、Y_GATA_H4、DYS448、DYS527a/b。