[发明专利]糙皮侧耳发酵液的制备方法及该发酵液在降解黄曲霉毒素B1中的应用

权利要求书

1.糙皮侧耳发酵液的制备方法，是将糙皮侧耳(Pleurotus ostreatus)CICC 14012接种于含有碳源、氮源、无机盐及微量元素的无菌发酵培养基中进行通气发酵制成发酵液；其特征在于：

发酵培养基由如下质量百分含量的原料组成：

土豆淀粉6.0％-7.0％，蔗糖1.8％-2.2％，酵母膏0.18％-0.22％，硫酸铵0.29％-0.33％，磷酸二氢钾0.25％-0.30％，硫酸镁0.15％-0.18％，维生素B₁0.0001％-0.0003％，微量元素溶液5.0％-6.0％，藜芦醇430μL/L-470μL/L，吐温800.1％-0.13％，余量为无菌水，pH＝4.9-5.3；

微量元素溶液由以下原料组成：

氯化钙1500mg，硫酸亚铁150mg，硫酸锌100mg，硫酸铜150mg，硫酸锰1000mg，硫酸钴200mg，硫酸铝钾20mg，硼酸10mg，钼酸钠20mg，定容至1000mL；

通气发酵的工艺条件如下：

接种量为体积比＝6-8∶100，温度为26℃-28℃,通气量为1∶0.7-1.2vvm，压力为0.03Mpa-0.05Mpa，培养周期为不低于240小时。

2.根据权利要求1所述的糙皮侧耳发酵液的制备方法，其特征在于所述的糙皮侧耳菌种在接入无菌发酵培养基前经过扩大培养。

3.根据权利要求2所述的糙皮侧耳发酵液的制备方法，其特征在于所述的扩大培养包括斜面菌种、平皿菌种的制备、一级种子的制备以及二级种子的制备。

4.根据权利要求3所述的糙皮侧耳发酵液的制备方法，其特征在于所述的斜面菌种的制备采用马铃薯培养基，平皿菌种的制备采用葡萄糖培养基，温度为25℃-27℃，培养周期为4-5天。

5.根据权利要求3所述的糙皮侧耳发酵液的制备方法，其特征在于所述的一级种子的制备以及二级种子的制备中种子培养基采用如下质量百分含量的原料组成：

土豆汁18％-21％，葡萄糖1.8％-2.2％，酵母膏0.25％-0.30％，硫酸铵0.29％-0.33％，磷酸二氢钾0.25％-0.30％，硫酸镁0.15％-0.18％，维生素B₁0.0001％-0.0003％，微量元素溶液3.5％-4.5％，余量为无菌水，pH＝5.0-5.5；

微量元素溶液由如下质量的原料组成：

氯化钙1500mg，硫酸亚铁150mg，硫酸锌100mg，硫酸铜150mg，硫酸锰1000mg，硫酸钴200mg，硫酸铝钾20mg，硼酸10mg，钼酸钠20mg，定容至1000mL。

6.根据权利要求3或5所述的糙皮侧耳发酵液的制备方法，其特征在于所述的一级种子的制备采用如下工艺步骤：

挑选生长旺盛、健壮的平皿菌种，在菌丝生长旺盛部位切成直径7mm-13mm圆片，按每瓶3-5片接种量将其接种到装有一级种子培养基三角瓶中，在温度为26℃-28℃条件下振荡培养85-96小时制成一级种子；装量为1000ml的三角瓶装入160-200ml一级种子培养基，以目测一级种子培养基中有一定量的菌丝体悬浮，以镜检菌丝体生长粗壮、均匀一致为一级种子培养终点。

7.根据权利要求3或5所述的糙皮侧耳发酵液的制备方法，其特征在于所述的二级种子的制备采用如下工艺步骤：

按照一级种子与二级种子培养基的体积比＝9-11∶100的比例，将一级种子接入灭菌后装有二级种子培养基的发酵罐中，装量为体积比＝60-70:100，在温度为26℃-28℃，通气量为1∶0.5-0.7vvm，压力为0.03Mpa-0.05Mpa的条件下进行不低于72小时的通气培养制成二级种子，以目测液体培养基中有大量的菌丝体悬浮，以镜检菌丝体生长粗壮、均匀一致为二级种子培养终点。

8.根据权利要求1所述的方法制备的糙皮侧耳发酵液在降解黄曲霉毒素B₁中的应用。