[发明专利]一种制备恩拉霉素对照品的方法

说明书

技术领域

本发明属于制药工程领域，具体涉及一种制备恩拉霉素对照品的方法。

背景技术

恩拉霉素(Enramycin)是由土壤中分离出来的放线菌StreptomycesfungicidiousNO.B5477发酵产生的一种由不饱和脂肪酸和十几种氨基酸结合成的多肽类抗生素。其中氨基酸分子构成环状多肽结构，脂肪酸位于多肽结构末端，据其末端脂肪酸种类不同，分为恩拉霉素A(C₁₀₇H₁₃₈Cl₂N₂₆O₃₁)和恩拉霉素B(C₁₀₈H₁₄₀Cl₂N₂₆O₃₁)。恩拉霉素则是主要由这两种成分组成的混合物(结构见图1)。该药于1966年由日本武田药品工业株式会社研发，1974年在日本正式注册，其后在许多国家被注册和广泛使用。其中，该药于1993年在我国成功注册，用于药物饲料添加剂。恩拉霉素对革兰氏阳性菌有很强的抑制作用，长期使用后不易产生抗药性，而且恩拉霉素内服极不易被吸收，药物主要通过粪便排出体外，残留畜禽体内较少。除此之外，它还能改变肠道内的细菌群落分布，有利于饲料营养成份的消化吸收，促进动物增重和提高饲料利用率，因此被世界上许多国家推荐作为抗生素促生长剂，是一种不错的饲料添加剂。

目前，市场上使用的恩拉霉素都是恩拉霉素预混剂，其中恩拉霉素都未经过纯化。如专利ZL201010198230.5和CN201210120843.6公开的方法，其都是直接通过含有恩拉霉素的发酵液直接进行预混剂的制备。随着生产技术的不断发展，科研工作者正在不断的对恩拉霉素的产品质量进行提高。如专利CN201210433028.5公开了一种恩拉霉素粗品的制备方法，其产品纯度可达到70％左右；CN201210153458.1公开了一种通过大孔吸附树脂纯化得到90％以上纯度恩拉霉素的方法；专利ZL201010213986.2涉及一种利用大孔弱酸性阳离子交换树脂分离提取恩拉霉素的方法，该方法可以使得恩拉霉素的纯度达到95％以上；专利ZL201110344875.X涉及一种从恩拉霉素发酵液种提取、分离和纯化恩拉霉素的方法，该方法的流程为将恩拉霉素发酵液进过热处理后，过滤，离心，收集菌体；向菌体加入甲醇溶液后，超声，过滤；滤液先酸化后碱化，然后脱色，脱色液过大孔吸附树脂进行吸附，用甲醇洗脱，收集洗脱液，经浓缩结晶后，冷冻干燥得到恩拉霉素，该方法得到的恩拉霉素的纯度达到95％左右；CN201310730536.4公开了一种通过弱酸性和弱碱性大孔吸附树脂联用的方法纯化得到99％以上的恩拉霉素的方法。除此之外，ZL201210433029.X涉及一种反相层析制备高纯度恩拉霉素A和B的方法，ZL201210159394.6涉及一种高压液相制备恩拉霉素标准品的方法。

恩拉霉素对照品除了对纯度有要求，其对恩拉霉素A和B的比例也有一定的要求，其最佳比例在1：1.1-1.8。就目前已有的技术来看，较高纯度的恩拉霉素的制备方法虽然有很多，但是并没有文献公开恩拉霉素A和B在最佳比例范围的高纯度的恩拉霉素对照品的制备方法。本发明提供的方法不仅能够很好地纯化恩拉霉素，使恩拉霉素的纯度达到95.0％以上，而且恩拉霉素A和B的比例不需要通过额外控制就能达到最佳。

发明内容

本发明的目的在于提供一种制备高纯度的恩拉霉素对照品的方法。

本发明涉及一种制备恩拉霉素对照品的方法，所述方法包括：

(1)提供恩拉霉素在pH值为6.0-7.5，醇的体积百分含量为30-40％的醇-水混合溶剂中的溶液；

(2)将步骤(1)所述溶液连续上样至装填了非极性大孔吸附树脂的树脂柱中，直到流出液中恩拉霉素A：恩拉霉素B＝1：2-2.5，停止上样；

(3)用pH值为2.0-4.0，醇的体积百分比为40％-80％的醇-水溶液洗脱步骤(2)所得树脂柱，得到含有恩拉霉素对照品的洗脱液；

(4)从步骤(3)所得洗脱液中分离得到恩拉霉素对照品。

其中，步骤(1)所述的pH值为6.5-7.0。

其中，步骤(1)所述溶液中醇的体积百分含量为35％，所述醇优选为甲醇或乙醇。

其中，步骤(1)所述恩拉霉素中恩拉霉素A：恩拉霉素B＝1：1.5-4，优选为1：2-3。

其中，步骤(2)所述非极性大孔吸附树脂选自H60，HB60，H41或HP20ss，优选H60。