[发明专利]一种鸭巴氏杆菌病和鸭大肠杆菌病二联蜂胶灭活疫苗及其制备方法

权利要求书

1.一种鸭巴氏杆菌病和鸭大肠杆菌病二联蜂胶灭活疫苗，包括抗原和佐剂，其特征在于，所述抗原为鸭巴氏杆菌CAU0085菌株和鸭大肠埃希氏菌CVCC1560菌株的灭活抗原浓缩-重悬稀释液按1：1混合而成，占所述灭活疫苗总体积的60％～68％，所述佐剂为蜂胶乙醇浸出液，占所述灭活疫苗总体积的27％～33％，还包括5～7％的黄芪多糖。

2.如权利要求1所述的疫苗，其特征在于，所述鸭巴氏杆菌CAU0085菌株抗原液灭活前活菌数在2.5×10⁹CFU/ml～4.0×10⁹CFU/ml之间,鸭大肠埃希氏菌CVCC1560菌株的抗原液灭活前活菌数在6.0×10⁹CFU/ml～7.0×10⁹CFU/ml之间。

3.如权利要求1所述的疫苗，其特征在于，所述鸭巴氏杆菌CAU0085菌株和鸭大肠埃希氏菌CVCC1560菌株的抗原浓缩稀释液浓度均大于或等于2.0×10⁹CFU/ml。

4.如权利要求1所述的疫苗，其特征在于，所述疫苗中不含有硫柳汞。

5.一种如权利要求1～4任一项所述的鸭巴氏杆菌病和鸭大肠杆菌病二联蜂胶灭活疫苗的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)蜂胶乙醇浸出液：蜂胶在低温下贮存，使用时先将蜂胶置-15℃冷冻24-48h，再用冷冻粉碎机磨碎过筛，按1:4的比例加入95％乙醇，在37℃浸提48-72小时，冷却、过滤，即得纯净蜂胶乙醇浸出液，浸出液的蜂胶干物质含量不小于32g/ml；

2)制备生产用菌株：将鸭巴氏杆菌CAU0085菌株和鸭大肠埃希氏菌CVCC1560菌株进行繁殖制备生产用菌株，并对该生产用菌株进行纯粹检验；

3)制备抗原液：将步骤2)的生产用菌株分别接种到相应的制苗用培养基培养，制备抗原液；并进行纯粹检验；

4)活菌计数：分别从步骤3)所获得的两种抗原液中取样，对鸭巴氏杆菌CAU0085菌株和鸭大肠埃希氏菌CVCC1560菌株进行活菌计数，以确定培养的菌数；

5)灭活：两种抗原液经甲醛灭活制得灭活抗原液，并进行灭活检验；

6)超滤浓缩：将上述两种灭活的抗原液用超滤仪浓缩4倍，弃去上清，制得其灭活抗原浓缩液；

7)疫苗成品完成：先将两种灭活的抗原浓缩液稀释；再将两种灭活的抗原浓缩稀释液按1：1的比例混合；接着，加入黄芪多糖摇匀，再加入步骤1)的蜂胶乙醇浸出液混合搅拌30分钟，搅拌5min，制得所述鸭巴氏杆菌病和鸭大肠杆菌病二价蜂胶灭活疫苗。

6.如权利要求5所述的鸭巴氏杆菌病和鸭大肠杆菌病二联蜂胶灭活疫苗的制备方法，其特征在于，所述鸭巴氏杆菌CAU0085菌株抗原液灭活前活菌数在2.5×10⁹CFU/ml～4.0×10⁹CFU/ml之间,鸭大肠埃希氏菌CVCC1560菌株的抗原液灭活前活菌数在6.0×10⁹CFU/ml～7.0×10⁹CFU/ml之间。

7.如权利要求5所述的鸭巴氏杆菌病和鸭大肠杆菌病二联蜂胶灭活疫苗的制备方法，其特征在于，步骤7)的抗原稀释剂为注射用水，稀释后，所述鸭巴氏杆菌CAU0085菌株和鸭大肠埃希氏菌CVCC1560菌株的抗原浓缩稀释液浓度均大于或等于2.0×10⁹CFU/ml。

8.如权利要求5所述的鸭巴氏杆菌病和鸭大肠杆菌病二联蜂胶灭活疫苗的制备方法，所述黄芪多糖的质量百分比为5～7％，所述蜂胶的质量百分比为27～33％，所述鸭巴氏杆菌CAU0085菌株和鸭大肠埃希氏菌CVCC1560菌株的灭活抗原浓缩-重悬稀释液的质量百分比为60％～68％。