[发明专利]利用SNP标记rs16287910鉴别蜂群王浆高产性状的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种鉴别蜜蜂蜂群王浆高产性状的方法，具体涉及一种利用SNP标记rs16287910鉴别蜂群王浆高产性状的方法，属生物技术领域。

背景技术

蜂王浆具有许多重要的营养和药物价值，对人类健康十分有益，是天然的滋养食品。我国是养蜂大国，蜂王浆的产量占世界总量的90%以上，这与我国饲养的蜜蜂品种有着密不可分的关系。我国的蜂业科学家和科技人员经过蜜蜂集团闭锁繁殖育种方法培育出了“浙农大1号”和萧山浆蜂，产浆能力显著高于中华蜜蜂和其它蜂种，同时也具有良好的蜂蜜采集能力，已成为我国的特有和主要饲养蜂种。一直以来，我国的蜂业科技工作者致力于王浆高产蜜蜂的相关研究，以期发现王浆高产机制和王浆高产性状相关的遗传标记等，加强王浆高产蜂种的保种和选育工作，充分发挥我国优良蜂种资源的优势。就王浆高产性状相关研究、分子标记意义和SNP技术及其在蜜蜂研究领域的应用等方面进行的研究概述如下：

1、王浆高产性状相关标记的研究

（1）形态学遗传标记：蜜蜂咽下腺是位于工蜂头部的合成并分泌蜂王浆的主要腺体，其活性常被用于衡量蜜蜂的泌浆能力。邵瑞宜等（2003）发现工蜂头重与咽下腺重量存在极显著相关性，且咽下腺重量可作为衡量王浆生产性能的重要指标，因此吐浆工蜂的头部重量与王浆生产性能可能存在一定相关性。郑爱娟等（2010）发现，浆蜂工蜂蛹的头重在各日龄均极显著高于原种意大利蜜蜂工蜂蛹头重，工蜂头重有可能成为王浆高产蜂种在外部形态学水平上的标记。此外，人们研究咽下腺的解剖形态学发现，工蜂的咽下腺小囊数、咽下腺大小和重量、以及咽下腺体外合成蛋白质的速率均可作为咽下腺活性的衡量指标，其中工蜂的咽下腺长度与王浆产量的相关性最大，可能作为意蜂王浆生产性能较理想的形态学遗传标记。

（2）细胞学遗传标记：通过对“浙农大1号”意蜂雄蜂和原种意蜂雄蜂的染色体核型进行分析比较发现，两个不同蜂种雄蜂的第7、10、12 条染色体的臂比存在着极显著差异。这种差异可能是“浙农大1号”意蜂雄蜂染色体复制时，控制产浆性状的多对等位基因片段重复复制，造成了微效基因数增多的缘故。染色体G 带分析中还发现第3条染色体“浙农大1号”意蜂比原种意蜂多了一个条带。

（3）生化遗传标记：同工酶是生化标记的一种，由于遗传差异可以产生多种酶形式。在蜜蜂领域研究比较多的是苹果酸脱氢酶（MDH），该酶由三个等位基因编码：MDH Ⅰ、MDH Ⅱ和MDH Ⅲ，只有MDH Ⅱ在蜜蜂的不同级型和发育阶段表现出多态性。关迎辉等（1994）研究发现，王浆高产蜜蜂（“浙农大1号”意蜂）的MDH Ⅱ杂合度比其他两种意蜂（湖北意蜂和原种意大利蜜蜂）的高，且新发现了其他两种王浆低产意蜂中所没有的aa、ab 基因型，可作为王浆高产蜂种的生化遗传标记。此外，西方蜜蜂的三个蜜蜂亚种的MDH Ⅱ的基因型频率、基因频率及杂合纯合度均存在极显著差异，这一结果表明，可通过测定MDH Ⅱ的基因频率和杂合纯合度从生化遗传角度对不同蜂种进行鉴定。鲍秀良（1997）研究报道，王浆高产蜜蜂（“浙农大1号”意蜂）及其他四种意蜂品系的MDH Ⅱ多态性呈显著性差异。综上得知，蜜蜂的苹果酸脱氢酶Ⅱ（MDH Ⅱ）有可能成为王浆高产性状相关的生化水平的遗传标记。

（4）分子遗传标记：基因多态性是指在生物体中普遍存在的两种或两种以上的基因型或等位基因，在有关王浆高产蜂种遗传标记的研究中也有应用。“浙农大1号”、平湖和萧山浆蜂均为王浆高产蜂种，分属于3种不同的蜜蜂品系。张娅娟等（2001）通过对这三个品种的蜜蜂进行随机扩增多态DNA-PCR（RAPD-PCR）分析，得到了共同的特异性DNA片段W316bp，这一现象说明该DNA片段可能与王浆高产性状相关。接着，蒋滢等（2002）又分别对这三种浆蜂的工蜂和雄蜂进行了DNA多态性图谱分析，在三种蜜蜂的工蜂中均有W316bp的存在，但在雄蜂中没有发现，这表明W316bp仅存在于工蜂中。王尉平等（2002）采用RAPD-PCR技术同时分析了3个王浆高产蜂种和王浆低产蜂种卡尼鄂拉蜂的基因多态性，结果在卡尼鄂拉蜂中没有发现W316bp，而在3种浆蜂中仍有检测到，进一步证明了W316bp可作为王浆高产蜂种的遗传标记。随后，戴英等（2003）不仅研究了3种浆蜂，而且对本地意蜂、黑环系蜜蜂等也进行了研究，采用特征序列扩增区域（SCARs）法对W316bp进行验证，结果与前人的研究一致，表明了W316bp很可能是王浆高产性状相关的一个分子标志。之后金水华（2003，2004）也通过实验证明了W316bp的可靠性。