[发明专利]沙门氏菌夹心DNA杂交快速检测用探针、试剂盒和检测方法

权利要求书

1.沙门氏菌夹心DNA杂交快速检测用探针，其特征在于：包括SAL捕获探针和SAL检测探针，其中SAL捕获探针的DNA序列为SEQIDNO.1，SAL检测探针的DNA序列为SEQIDNO.2。

2.一种沙门氏菌夹心DNA杂交快速检测用试剂盒，其特征在于：包括包被了polydT的96孔板、菌液溶解液、溶解缓冲液、核酸杂交液、探针液、洗涤液、显色液、终止液、阳性对照液和阴性对照液，其中一个微孔反应的用量为：

所述探针液由以下成分组成：

DNA序列为SEQIDNO.1的4μmol/L的SAL捕获探针20.8μL；

DNA序列为SEQIDNO.2的4μmol/L的SAL检测探针20.8μL；

合计41.6μL；

所述溶解液，体积为30μL；

所述核酸杂交液，体积为83.4μL；

所述洗涤液，需10倍稀释后使用，体积为150μL；

所述显色液，体积为150μL；

所述终止液，体积为100μL。

3.根据权利要求2所述沙门氏菌夹心DNA杂交快速检测用试剂盒，其特征在于：所述阳性对照液为SAL菌液；所述阴性对照液为非SAL菌液。

4.一种沙门氏菌夹心DNA杂交快速检测方法，包括如下步骤：

（1）增菌用营养肉汤（NB）扩增待检样品12h，获得待检样品液；

（2）菌液溶解反应将待检样品液和溶解液按4﹕1的比例在玻璃管中混合，放入65℃水浴锅中培养5分钟；

（3）杂交反应吸取150μL步骤（2）溶解后的菌液加到包被了polydT的微孔中，再按2:1比例混合核酸杂交液和探针液，吸取125μL加到每一个含有菌液的微孔中，在室温下于轨道式摇床上以150rpm速度摇板2分钟后置于培养箱中进行温育；温育后用1×PBSTBuffer洗板5次，加150μLTMB显色液到每一个微孔中室温下温育20分钟，最后加入100μL2M的硫酸终止液，放入多功能酶标仪中读取450nm处的吸光度；

（4）结果判定（菌液OD值-空白对照OD值）/（阴性对照OD值-空白对照OD值）≥2.1即可判定为阳性，且显色液加入微孔后变为蓝色，颜色越深病原菌浓度越高。

5.根据权利要求4所述沙门氏菌夹心DNA杂交快速检测方法，其特征在于：所述探针液中捕获探针和检测探针按以1﹕1的比例混合。