[发明专利]鉴别布鲁氏菌A19疫苗株与野毒株的试剂盒

权利要求书

1.一种用于鉴别牛种布鲁氏菌疫苗株A19的引物对，其特征在于，两条引物序列分别为SEQ ID No.1 和SEQ ID No.2 所示。

2.权利要求1所述的引物对用于制备鉴别和/检测布鲁氏菌的试剂盒、芯片的应用。

3.权利要求1所述的引物对用于制备鉴别和/检测布鲁氏菌疫苗株A19的试剂盒、芯片的应用。

4.包括权利要求1所述的引物对的试剂盒。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，还包括：PCR反应液、DNA聚合酶、阳性质控标准品和阴性质控标准品。

6.一种非疾病诊断目的的鉴别布鲁氏菌A19疫苗株与其他布鲁氏菌野毒株或疫苗株的方法，其特征在于，

（1）提取待测样本的基因组DNA；

（2）以提取的样本基因组DNA为模板，进行PCR扩增，所采用的引物为权利要求1所述的引物对；

（3）取PCR产物，以琼脂糖凝胶电泳进行检测，观察是否出现牛种布鲁氏菌疫苗株A19引物对扩增出的562 bp及与之大小对应的条带；

（4）如果上述PCR检测结果与目的条带不符，则说明模板为布鲁氏菌阴性，如果PCR检测条带大小正确，则对阳性条带进行切胶回收纯化，然后再进行序列测定；

（5）结果判定：对使用SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2引物对纯化的562 bp或与之大小对应的产物进行测序，如果测序结果峰图为单一峰，与SEQ ID No.3比对后完全匹配，则该样本为A19疫苗株；如果测序结果峰图为单一峰，与SEQ ID No.3比对后在第344位点处多出7个核苷酸序列，则该样本为除A19疫苗株以外的其他布鲁氏菌野毒株或疫苗株；如果测序结果与SEQ ID No.3比对，在峰图的序列第354位后，即AGATTTCAGA后，出现套峰，则该样本为A19疫苗株和其他布鲁氏菌株混合。

7.权利要求6所述方法，其特征在于，所述待测样本为血液、奶样、组织样本、气溶胶样本。

8.权利要求6所述方法，其特征在于，PCR扩增条件为：94℃ 3min，94℃ 30sec、60℃30sec、72℃ 30sec，35个循环，72℃ 10min。