[发明专利]药物注射剂过敏类过敏反应的检测方法及所用染料新用途

权利要求书

1.药物注射剂过敏类过敏反应的检测方法，其特征在于：采用能够特异染色细胞膜、通过胞吞作用进入细胞内的细胞膜荧光染料标记细胞脱颗粒模型上的囊泡循环现象，基于影像学信息进行分析，以高内涵系统作为检测手段，在高内涵系统上检测药物注射剂所导致细胞内荧光增强来反映细胞发生脱颗粒状况，通过荧光强度转化计算方法计算细胞脱颗粒阳性率来预测药物注射剂引发过敏类过敏反应的机会，所述细胞膜荧光染料为FM类染料或AM类染料，所述细胞脱颗粒模型包括RBL-2H3细胞株、P815细胞株或Ku812细胞株。

2.根据权利要求1所述的药物注射剂过敏类过敏反应的检测方法，其特征在于：所述细胞膜荧光染料为FM4-64、FM1-43、AM1-43或AM4-66。

3.根据权利要求1所述的药物注射剂过敏类过敏反应的检测方法，其特征在于：所述细胞脱颗粒模型为RBL-2H3细胞株时，用MEM完全培养基培养于37℃、饱和湿度的5％CO₂培养箱中,当细胞增长至80％丰度时进行传代，传代比例为1:5，每三天传代一次。

4.根据权利要求1所述的药物注射剂过敏类过敏反应的检测方法，其特征在于：所述高内涵系统作为检测手段，具体方法为：细胞接种于孔板中后，加入Hoechst33342染色细胞核，共孵育30min后洗去染料，然后加入细胞膜荧光染料溶液，再次共孵育30min后进行高内涵检测，获得细胞荧光图像；发生脱颗粒的细胞胞质内荧光强度明显升高，计算胞质内荧光强度增加的细胞个数，据此得到细胞脱颗粒的阳性细胞百分率。

5.根据权利要求2所述的药物注射剂过敏类过敏反应的检测方法，其特征在于：所述高内涵系统中细胞脱颗粒的阳性细胞百分率的具体计算方法为：采用软件分析高内涵系统所获得的细胞荧光图片，首先根据Hoechst33342染色的细胞核来识别图片中所有细胞，然后计算每个细胞胞质中FM4-64荧光强度；按照8％脱颗粒率来确定空白对照组荧光强度值，然后采用此荧光强度值去分析同批阳性对照组和测试药物组中的荧光增强阳性细胞数目，凡是细胞内荧光强度高于对照组荧光强度值者确定为阳性细胞，每个测试孔内按照：细胞脱颗粒率＝阳性细胞总数/细胞总数计算，细胞脱颗粒率越高，提示测试样品引起过敏/类过敏反应的几率越大。

6.权利要求1所述药物注射剂过敏类过敏反应的检测方法中所用细胞膜荧光染料作为药物注射剂过敏类过敏反应的检测试剂方面的应用。

7.根据权利要求6所述药物注射剂过敏类过敏反应的检测方法中所用细胞膜荧光染料作为药物注射剂过敏类过敏反应的检测试剂方面的应用，其特征在于：所述细胞膜荧光染料为FM4-64、FM1-43、AM1-43或AM4-66。