[发明专利]转基因大豆MON87705的LAMP检测引物组、试剂盒及检测方法

权利要求书

1.转基因大豆MON87705的LAMP检测试剂盒，包括以下组分：

(1)检测引物溶液：转基因大豆MON87705的LAMP检测引物组，包括外引物F3、外引物B3、内引物FIP、内引物BIP和环引物LB，其核苷酸序列分别如下所示：

外引物F3：GGTAATTACTCTTTCTTTTTCTCC(SEQ ID NO：1)；

外引物B3：TCTACTCATCCTTAGCGAGT(SEQ ID NO：2)；

内引物FIP：TGTAAATGGCTTCATGTCCGGTTTTATATTGACCATCATACTCATTGC(SEQ ID NO：3)；

内引物BIP：TTGAAGAGACTCAGGGTGTTGTTTTCAACTCTCATATTTTTTTCAGGAC(SEQ ID NO：4)；

环引物LB：ATCACTGCGGTTTGGCCTTTG(SEQ ID NO：5)；

由上述的5条引物配制的检测引物溶液，外引物F3、外引物B3、内引物FIP、内引物BIP和环引物LB的浓度依次为4～6μmol/L、4～6μmol/L、32～48μmol/L、32～48μmol/L和4～6μmol/L；

(2)具有链置换活性的DNA聚合酶：浓度为7～9U/μL；

(3)10×反应缓冲液：200mmol/L Tris-HCl、pH 8.8，100mmol/L KCl，100mmol/L，(NH4)2SO4，40～100mmol/L MgSO4，6～14mol/L甜菜碱；

(4)dNTPs溶液，由浓度分别为10mmol/L的dATP、dCTP、dGTP、dTTP四种脱氧核糖核苷酸溶液等体积混合而成；

(5)显色剂：1000×SYBR GREEN I荧光染料。

2.根据权利要求1所述的LAMP检测试剂盒，其特征在于：所述的检测引物溶液中含有5μmol/L外引物F3、5μmol/L外引物B3、40μmol/L内引物FIP、40μmol/L内引物BIP、5μmol/L环引物LB。

3.根据权利要求1所述的LAMP检测试剂盒，其特征在于：所述的具有链置换活性的DNA聚合酶为Bst DNA聚合酶，浓度为8U/μL。

4.根据权利要求1所述的LAMP检测试剂盒，其特征在于：所述的10×反应缓冲液中MgSO4、甜菜碱的浓度分别为80mmol/L、8mol/L。

5.利用权利要求1～4任一项所述的试剂盒检测转基因大豆MON8770 5的方法，包括以下步骤：

(1)提取待测样品的基因组DNA；

(2)配制待测样品的LAMP检测反应体系：在200μL反应管内加入模板DNA 2～5μL、检测引物溶液1μL、Bst DNA聚合酶1μL、10×反应缓冲液2.5μL、dNTPs溶液2～5μL，用灭菌去离子水或超纯水补齐至总体积为25μL；

(3)运行LAMP扩增反应：63～65℃孵育30～60min，80℃孵育5min终止反应；

(4)LAMP扩增结果的鉴定：在反应管中加入1～2μL显色剂，通过肉眼观察显色结果来判断扩增结果。