[发明专利]一种甘草总黄酮的含量测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及中草药检测技术领域，具体是指一种甘草总黄酮的含量测定方法。

背景技术

目前国内外学者对甘草的化学和药理作用进行了许多研究，主要有效成分有三萜皂苷和黄酮类化合物。其中，黄酮类成分具有明显的抗溃疡、解痉、抗炎、降血脂、镇痛和雌性激素样作用。近年来还发现甘草黄酮对艾滋病毒有很强的抑制增殖作用，对甘草黄酮的研究应用已引起了人们的重视，甘草总黄酮主要以二氢黄酮类化合物为主。

由于目前测定甘草总黄酮含量的主要方法是采用碱性比色法，但是该方法不稳定，操作复杂，影响因素较多，造成测定出来的含量结果不准确。

基于以上研究并设计了一种甘草总黄酮的含量测定方法。

发明内容

本发明的目的在于：提供一种甘草总黄酮的含量测定方法，该含量测定方法稳定，可靠，操作简单。

本发明通过下述技术方案实现：一种甘草总黄酮的含量测定方法，包括以下步骤：1）采用紫外可见分光光度计测定；

2）制备柚皮苷对照品溶液，取柚皮苷对照品约10mg，精密称定，置10ml容量瓶中，用甲醇溶解，定容即得；

3）制备甘草中药材样品液，称取甘草中粉0.1g，精密称定，至100ml容量瓶中，加甲醇80ml超声处理90min，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，滤过即得；

4）制备甘草酮提取物样品液，取甘草酮提取物0.10g，精密称定，至100ml量瓶中，加甲醇80ml，超声处理90min，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，滤过即得；

5）确定检测波长，分别取上述柚皮苷对照品溶液、甘草中药材样品液、甘草酮提取物样品液各0.05、1.00、0.1ml，置10ml容量瓶中，加入甲醇至1ml，准确加入KOH溶液0.5ml，甲醇定容，摇匀，放置1小时，以甲醇为参比液，于200—600mm波长处扫描；

6）确定对照品溶液的显色时间；

7）取甘草中药材5份，精密称定，于50ml容量瓶中，分别加入柚皮苷对照品2.0mg，分别加入加甲醇1ml，准确加入KOH溶液0.5ml，甲醇定容至10ml，放置，以甲醇作为对照溶液，测定吸收度。

进一步地，为了更好的实现本发明，还包括以下技术特征，所述步骤（5）中甘草中药材样品液、甘草酮提取物样品液与对照品溶液UV最大吸收为420—430nm。

进一步地，为了更好的实现本发明，还包括以技术特征，所述步骤（5）中确定的检测波长为422nm。

进一步地，为了更好的实现本发明，还包括以下技术特征，所述步骤6）确定对照品溶液的显色时间步骤为，精密量取柚皮苷对照品溶液0.02ml，置10ml容量瓶中，准确加入KOH溶液0.5ml，甲醇定容，摇匀，以甲醇作为空白对照，分别放置10、20、30、40、50、60、90、120、150、180min，测定吸收度。

进一步地，为了更好的实现本发明，还包括以下技术特征，所述对照品溶液显色时间为1h。

具体实验方法为：

仪器与试剂FA2004N电子天平，生产厂家：上海精密科学科技有限公司；SB2200超声波清洗器，生产厂家：上海科导超声仪器有限公司，DZF型真空干燥箱，生产厂家：上海精密实验设备有限公司，Angilent(8453型紫外分光光度计)，BuchiR-200型旋转蒸发器（瑞士Buchi公司），柚皮苷对照品，生产厂家：中国药品生物制品检定所，甘草药材，生产厂家：上海华宇药业有限公司。

实验步骤：

对照品溶液的制备取柚皮苷对照品10mg，精密称定，置10ml容量瓶中，用甲醇溶解，定容即得。

供试品溶液的制备1）药材样品液的制备：取甘草中粉0.1g，精密称定，至100ml容量瓶中，加甲醇80ml，超声处理90min，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，过滤即得；2）甘草黄酮提取物样品液的制备取甘草黄酮提取物约0.10g，精密成定，至100ml容量瓶中，加甲醇80ml，超声处理90min，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，滤过即得。

确定检测波长分别取上述柚皮苷对照品溶液、甘草中药材溶液、甘草黄酮提取物样品液各0.05ml、1.00ml、0.10ml，置10ml容量瓶中，加入甲醇至1ml，准确加入10%KOH溶液0.5ml，甲醇定容，摇匀，放置，以甲醇为参比液，于200—600nm波长处扫描，紫外光谱图如图1。结果表明，甘草中药材供试品溶液、甘草黄酮提取物样品液与对照品显色溶液UV最大吸收为422nm。