[发明专利]侵润宫颈恶性肿瘤的T细胞所靶向的用于疫苗的HPV表位

说明书

本发明涉及对HPV特异性E6和E7癌蛋白具有特异性的新的CD4⁺和CD8⁺T细胞表位，涉及包含这些新的T细胞表位的肽，以及涉及包含这些肽、用于预防和/或治疗HPV相关疾病的(疫苗)组合物。优选的表位由侵润宫颈瘤病变的T细胞或由来自引流淋巴结的T细胞识别，并由HLA‑DQ或HLA‑DP分子或HLA‑B呈递。

发明领域

本发明涉及医药和免疫学领域。特别涉及可用于预防、治疗和/或诊断HPV相关疾病的新的HPV表位。

发明背景

宫颈癌是全世界第二高发的癌症(Bosch et al.2003)。在大约三分之二的患者中，宫颈癌的致病原因是高风险的16型和18型人乳头状瘤病毒(human papilloma virus,HPV)(Bosch et al.1995,Munoz et al.2003)。HPV基因组编码2种致癌蛋白，E6和E7，由于它们是恶性细胞表型的发作和维持所需的，因此其在高级宫颈病变和宫颈癌中组成性表达(Zur Hausen,1996)。

这些癌蛋白的肿瘤特异性表达，以及在几乎二分之一的宫颈癌患者的外周血中检测到低水平的E6-和E7特异循环性T细胞的存在(de Jong et al.2004,van der Berg etal.2001,Welters et al.2003,Welters et al.2006，Ressing et al.1996,Bontkes etal.2000,Luxton et al.1996)，表明它们可能充当肿瘤排斥抗原。然而，循环的HPV特异性T细胞的存在并不意味着它们有助于抗肿瘤应答。为了控制疾病，这些T细胞应当至少能够深入肿瘤位点。事实上，一定比例的宫颈癌为淋巴细胞所侵润(Bethwaite et al.1996,Chaoet al.1999,Piersma et al.2007)，但或许是由于从肿瘤组织中建立T细胞培养物相对困难，因而对侵润这些宫颈肿瘤的T细胞的特异性和类型尚缺少透彻的了解。然而，一些早期的先行者能够从肿瘤中分离到HPV特异性的肿瘤侵润性淋巴细胞(tumor infiltratinglymphocytes,TIL)，结果是鉴定出HPV16的两个单独的CD8⁺T细胞表位(Evans et al.1997,Oerke et al.2005)和两个低流行高风险HPV59和HPV33亚型的CD4T细胞表位(Hohn etal.1999,Hohn et al.2000)。然而，迫切需要对侵润宫颈组织侵润性淋巴细胞(cervicaltissue-infiltrating lymphocytes)开展更大规模的研究，以便了解HPV特异的适应性免疫应答在宫颈癌中的作用和角色。此外，这将允许合理地设计成功的免疫干涉策略。

最近的研究表明，两种细胞因子即IL-7和IL-15在CD4⁺和CD8⁺效应记忆T细胞(effector memory T cells)的扩增和存活中发挥主要作用。IL-7为效应T细胞提供存活信号(Li et al.2003)。IL-15是启动T细胞分裂的重要生长因子，并且与通常用于扩增TIL培养物的IL-2相反，其不限制T细胞的连续扩增(Li et al.2001)。而且，IL-15也能作为CD8(⁺)记忆T细胞的抗原非依赖性激活剂(Liu et al.2002)。总之，IL-7和IL-15能够与非常高效的效应记忆T细胞一起扩增，而中枢记忆T细胞的应答性更小并且天然T细胞不能对这些细胞因子的刺激作出应答(Geginat et al.2001,McKinlay et al.2007,Bacchetta etal.2002)。

以往的许多研究已经报道了II型MHC(MHC class II)限制来自外周血单核细胞(PBMC)的T细胞识别由HPV16和/或对E7蛋白的序列所组成的合成肽。