[发明专利]包含高浓度的生物活性分子的组合物及其制备工艺

权利要求书

1.一种从细菌细胞制备至少一种感兴趣的生物活性分子的高纯度样品的大规模工艺， 其包括以下步骤：

a)通过使所述大量细胞的细胞悬浮液与溶胞溶液接触而制备溶胞产物溶液；

b)用中和溶液中和所述溶胞产物溶液以制备包含被中和的溶胞产物溶液和碎片的分 散体；

c)通过至少一个过滤器过滤所述分散体；

d)对所述被中和的溶胞产物溶液进行离子交换分离以产生离子交换洗出液；和

e)对所述离子交换洗出液进行疏水作用分离以产生疏水作用溶液。

2.根据权利要求1所述的方法，其中步骤a)包括在高剪切的串联混合器中使所述细胞 悬浮液与溶胞溶液混合。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中步骤b)包括在泡罩混合器中将所述溶胞产物溶 液与所述中和溶液混合。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中步骤e)包括使用疏水作用柱或疏水作 用膜进行疏水作用分离以形成疏水作用溶液。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其还包括以下步骤；

f)通过所述疏水作用溶液的超滤来制备生物活性分子的溶液。

6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其还包括以下步骤：

g)通过所述生物活性分子的溶液的无菌过滤来制备至少一种生物活性分子的无菌溶 液。

7.根据权利要求1-6中任一项所述的方法，其还包括将所述分散体保持一段时间以使 所述被中和的溶胞产物溶液与所述碎片分离并且通过至少一个过滤器过滤所述被中和的 溶胞产物溶液。

8.根据权利要求1-7中任一项所述的方法，其中制备步骤包括在混合器中使所述细胞 悬浮液与所述溶胞溶液接触约1分钟至约20分钟的持续时间。

9.根据权利要求8所述的方法，其中所述持续时间为从约4分钟至约8分钟。

10.根据权利要求8所述的方法，其中所述持续时间为约5分钟。

11.根据权利要求1-8中任一项所述的方法，其中所述生物活性分子是质粒。

12.根据权利要求1-8中任一项所述的方法，其中所述离子交换是阴离子交换膜。

13.根据权利要求1-8、11或12中任一项所述的方法，其中步骤e)包括进行疏水作用分 离，包括丁基疏水作用色谱，以制备疏水作用溶液，即丁基疏水作用色谱溶液流出液。

14.根据权利要求1-8、或11-13中任一项所述的方法，其中所述方法包括从一个步骤基 本上连续地过渡到随后的步骤，并且包括通过将所述溶胞产物收集在容器中并将所述分散 体通过初级过滤器而使所述分散体中的所述被中和的溶胞产物溶液与所述碎片分离以制 备最初的粗的被中和的溶胞产物溶液。

15.根据权利要求14所述的方法，其还包括使所述最初的粗的被中和的溶胞产物溶液 通过二级过滤器以产生随后的粗的被中和的溶胞产物溶液。

16.一种从细菌细胞制备至少一种感兴趣的生物活性分子的高纯度样品的大规模工 艺，其包括以下步骤：

使所述细菌细胞以细胞分散体与溶胞溶液接触以形成溶胞产物溶液；

通过用泡罩塔混合器将中和溶液混入所述溶胞产物溶液而中和所述溶胞产物溶液以 形成被中和的混合物；

通过初级过滤器和二级过滤器过滤所述被中和的混合物以形成滤过的溶液；

使所述滤过的溶液通过离子交换柱以形成离子交换溶液；

使所述离子交换溶液通过疏水作用柱或疏水作用膜以形成疏水作用溶液；和

超滤所述疏水作用溶液以形成至少一种感兴趣的生物活性分子的高纯度样品；

其中在从接触步骤到使滤过的溶液通过的步骤的大规模工艺中的一个步骤向随后步 骤的每次过渡基本上连续发生。