[发明专利]一种利用嗜松青霉转化甜菊糖制备杜尔可苷A的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种制备杜尔可苷A(DA)的新方法，特别是用嗜松青霉发酵产生的菌或酶转化RC为DA的方法。属于天然产物的生物转化领域。

背景技术

甜菊糖苷是从甜菊叶中提取的高倍天然甜味剂，因其安全、低热等特点，被誉为“最佳天然甜味剂”、“第三糖源”。中国是目前世界上最大的甜菊糖生产国和出口国。甜菊糖苷不仅广泛应用于食品行业，在医药行业也倍受青睐。甜菊糖苷的生物活性广泛，主要有降血压、调节血糖、抗菌抗炎等活性(朱焕铃,刘景彬,谢印芝.甜菊糖苷的性质及在食品中的应用[J].食品研究与开发,2011,11:189-192；Sidd Purkayastha,George Pugh Jr.,Barry Lynch,Ashley Roberts,David Kwok d,Stanley M.Tarka Jr.In vitro metabolism of rebaudioside B,D,and Munder anaerobic conditions:Comparison with rebaudioside A[J].Regulatory Toxicology and Pharmacology,2014,68:259–268.)。

甜菊糖苷的通用结构式为：

表1甜菊糖苷主要成分与结构

表2甜菊叶中不同糖苷的含量、甜度比较

从甜叶菊中提取得到甜菊糖含多种成分：甜菊苷、莱鲍迪苷(Rebaudioside)A、B、C、D、E、F、甜茶苷及杜尔可苷A(Dulcoside A，简称DA)。由表1中各甜菊糖苷的结构可见，莱鲍迪苷C的C13位的β-1,2糖苷键选择性水解断裂可以产生杜尔可苷A。而从表2(陈秋实.甜菊苷的研究概况[J].中国药师,2007,10(6):598-599；杨远志,庞明利,杨海军.天然甜味剂甜菊糖中国市场应用处于导入期[N].中国食品报,2009-11-24)中数据可见：甜叶菊中甜菊苷占总苷量的46-48％，莱鲍迪苷A占总苷量的20-30％，莱鲍迪苷C占总苷量的4-7％。杜尔可苷A、甜茶苷，莱鲍迪苷B、D、E在甜叶菊中含量稀少，难以直接从甜叶菊中获得大量的这些成分。这些稀有糖苷由于原料中含量少、提取成本高等方面的限制，是量少而价高的产品。研究表明甜茶苷、甜菊双糖苷等是备受关注的有着潜在药用价值的品种(陈育如,姜中玉,刘虎.一种由甜菊糖苷制备甜茶苷的方法[P]:中国,ZL200910035921.0.2010-5-5；陈育如,刘虎,姜中玉等.一种生物转化甜菊糖中甜菊苷为甜菊双糖苷的方法[P]:中国,CN201010170786.3.2010-10-13)。

甜菊糖的苷元甜菊醇分子具有对映贝壳杉烯型四环二萜骨架结构，具有独特的生理活性(Li J，Zhang D Y，Wu X M.Synthesis and biological evaluation of novel exomethylene cyclopentanone tetracyclic diterpenoids as antitumor agents[J].Bioorganic&Medicinal Chemistry Letters,2011,21(1):130-132；汪吴林,石浩.异斯特维醇衍生物的应用研究进展[J].浙江化工,2014,10:7-11)。杜尔可苷A水解掉去除鼠李糖基后，其产物是甜茶苷。甜茶苷具有降脂、降血糖、止咳、镇静、抗过敏、抗疲劳、增强免疫力等功能(谢莹,陈全斌,罗达伟等.高纯度甜茶苷抗疲劳及免疫调节功能研究[J].时珍国医国药,2010,21(6):1421-1422)。作为稀有甜菊糖苷类，因受原料供应的限制，目前杜尔可苷A的研究极少(Masaru Kobayashi,Shuji Horikawa,Isolde H.Degrandi,Junko Ueno,Hiroshi Mitsuhashi.Dulcosides A and B,new diterpene glycosides from Stevia rebaudiana.Phytochemistry,1977,16(9):1045-1048)。