[发明专利]携带人乳头瘤病毒16型多点突变型E7mm抗原基因的重组腺相关病毒载体及其构建方法与应用有效
| 申请号： | 201510492396.0 | 申请日： | 2015-08-12 |
| 公开（公告）号： | CN105177048B | 公开（公告）日： | 2018-02-02 |
| 发明（设计）人： | 刘勇;陈巧林;曾昭鹏;高洪吉;龚研浩;董文娟;张慧 | 申请（专利权）人： | 广东拓谱康生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/864 | 分类号： | C12N15/864;C12N7/01;C12N5/10;A61K48/00;A61K39/12;A61P31/20;A61P35/00 |
| 代理公司： | 广州胜沃园专利代理有限公司44416 | 代理人： | 张帅 |
| 地址： | 510000 广东省广州市高新技术产业开*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 携带 乳头 病毒 16 多点 突变型 e7 sub mm 抗原 基因 重组 相关 载体 及其 构建 | ||
1.一种携带人乳头瘤病毒16型(HPV-16)突变型E7mm抗原基因的重组腺相关病毒(rAAV)载体，是将腺相关病毒(AAV)载体中的腺相关病毒结构基因Rep和Cap剔除并带有AVV的p5启动子、巨噬细胞病毒(cytomegalovirus，CMV)启动子、SV40病毒启动子和beta肌动蛋白启动子(β-actin)中的任意一个启动子的AVV载体作为出发载体，将多点突变型HPV-16 E7mm抗原基因插入出发载体中，获得全新的rAVV载体，即携带HPV-16 E7mm抗原基因的重组腺相关病毒载体；所述多点突变型HPV-16 E7mm抗原基因为以下之一：
具有nt175(58aa)、nt280(94aa)两个突变位点的多点突变型基因，命名为HPV-16 E7mm22，其核苷酸序列如序列表中序列3所示；
具有nt271(91aa)、nt280(94aa)两个突变位点的多点突变型基因，命名为HPV-16 E7mm23，其核苷酸序列如序列表中序列4所示；
具有nt175(58aa)、nt271(91aa)、nt280(94aa)三个突变位点的多点突变型基因，命名为HPV-16 E7mm3，其核苷酸序列如序列表中序列5所示；
所述腺相关病毒载体为剔除腺相关病毒(AAV)结构基因Rep和Cap的腺相关病毒载体，其携带的启动子为p5启动子、巨噬细胞病毒(cytomegalovirus，CMV)启动子、人beta肌动蛋白启动子(β-actin)或SV40病毒早期启动子中的任意一个。
2.一种构建权利要求1所述重组腺相关病毒载体的方法，包括以下步骤：
1)将HPV-16 E7抗原的第58、91和94位的半胱氨酸(G)中两个或三个改变为甘氨酸(C)，即将HPV-16 E7基因开放读码框nt175、nt271、nt280中的两个或三个胸腺嘧啶(T)替换为鸟嘌呤(G)，得到具有两个或三个突变位点的多点突变型HPV-16 E7抗原基因，统一命名为HPV-16 E7mm；
2)分别将多点突变型HPV-16 E7mm抗原基因插入已将腺相关病毒结构基因Rep和Cap剔除的腺相关病毒载体中，分别得到携带多点突变型HPV-16 E7mm抗原基因的重组腺相关病毒载体(AAV/HPV-16 E7mm)或携带HPV-16 E7抗原基因的重组腺相关病毒载体(AAV/HPV-16 E7)；所述腺相关病毒载体携带的启动子为p5启动子、巨噬细胞病毒(cytomegalovirus，CMV)启动子、人beta肌动蛋白启动子(β-actin)或SV40病毒早期启动子中的任意一个。
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