[发明专利]一种抑制Survivin基因表达的siRNA及其应用

说明书

技术领域

本发明公开了一种抑制survivin基因表达的siRNA分子及其在制备抗肿瘤药物的应用，属于生物医药技术领域。

背景技术

目前，恶性肿瘤临床进展快、生存期短以及传统临床治疗的中远期疗效均不理想，化疗药物一方面起到治疗作用，同时另一方面，化疗药物的毒副作用对患者的身体起到破坏作用。因此，因而寻找新的肿瘤治疗策略是全球临床及科研工作者所面临的重大问题。随着分子生物学的发展，针对肿瘤基因进行靶向治疗成为癌症治疗研究的方向。药物作用于肿瘤某分子、某基因等靶向部位，一方面提高了疗效，另一方面减少了药物的用量。寻找能成为肿瘤治疗的标靶已成为治疗肿瘤的前提之一。可能成为药物作用的标靶包括：癌细胞具有的特殊的抗原、特殊生长因子受体、肿瘤血管生长相关因子、癌细胞特殊信息传递途径中的各种分子、癌细胞内细胞周期和细胞凋亡的调控分子。

人类survivin基因是1997年美国耶鲁大学的Ambrosini等利用效应细胞蛋白酶受体-1(effectorcellproteasereceptor-1，EPR-1)cDNA在人类基因组的杂交筛选中分离并克隆出来的，与EPR-1同位于染色体17q25，全长14.7kb，由3个内含子和4个外显子组成，其mRNA长约1.9kb，其编码产生的蛋白由142个氨基酸组成，相对分子量为16.5×10³，是近年来发现的凋亡抑制蛋白(inhibitorofapoptosisprotein，IAP)家族中的一个新成员，具有抑制细胞凋亡和维持细胞有丝分裂的双重功能，在正常的终末分化组织中几乎不表达。在生理状态下，survivin仅表达于成人分泌期子宫内膜、胎盘、睾丸、胸腺及胚胎中，但在病理状态下，survivin广泛表达于人类各种恶性肿瘤组织中，如胃癌、食管癌、结直肠癌、肝癌、乳腺癌、宫颈癌、肺癌、白血病、黑色素瘤、淋巴瘤、Ⅲ～Ⅳ期神经母细胞瘤等。survivin表达增高可抑制肿瘤细胞凋亡而促进其增殖，而且其表达与病程进展明显相关。因此，survivin可能作为一种新的肿瘤标志物，成为检测恶性肿瘤的指标。

RNA干扰survivin表达技术，RNA干扰(RNAinterference，RNAi)是指在生物体细胞内，外源性或内源性的双链RNA(double-strandedRNA)引起与其同源的mRNA特异性的降解，从而抑制survivin基因的转录和表达，具有高度特异性、高效性的特点。总结近年来的研究成果，其在临床应用中具有较广阔的前景。

发明内容

本发明公开一种抑制survivin基因表达的双链siRNA分子其在抗肿瘤药物的应用，是一种新的siRNA序列，可以抑制肿瘤细胞的增殖和转移。

本发明所述的双链siRNA分子，其特征在于，该双链siRNA分子是一种高效靶向survivin基因的广谱双链的小分子干扰RNA(siRNA)，具有如下序列结构：

正义链5＇-GAGACAGAAUAGAGUGAUA-3＇SEQIDNO:1

反义链5＇-UAUCACUCUAUUCUGUCUC-3＇SEQIDNO:2

本发明所述的双链siRNA分子的主干序列即为SEQIDNO：1和SEQIDNO：2所示的核苷酸序列，即正义链和反义链分别具有SEQIDNO:1和2所示的核苷酸序列的双链分子。

优选的，所述双链siRNA分子，具有如下的序列结构：

正义链：5＇-GAGACAGAAUAGAGUGAUAtt-3＇SEQIDNO:3

反义链：5＇-UAUCACUCUAUUCUGUCUCtt-3＇SEQIDNO:4。

本发明的siRNA分子来源于针对survivin基因开放阅读框的功能保守区而制备的siRNA分子库，该序列的正义链与survivin基因的mRNA结合，干扰survivin基因mRNA的翻译，从而抑制肿瘤细胞的分裂，使肿瘤细胞阻滞在G2/M期。

本发明的siRNA分子的优点在于，所制备的siRNA随机分布于survivin基因开放阅读框区段，长度可控性分布于19-23bp，可以提高有效靶点的命中率。