[发明专利]一种芦荟多糖指纹图谱的构建方法及其标准指纹图谱

权利要求书

1.一种芦荟多糖指纹图谱的构建方法，其特征在于，从芦荟叶中提取芦荟多 糖，将提取的芦荟多糖制备成GPC分析供试液，经凝胶渗透色谱仪分离检测，获得 芦荟多糖的指纹图谱。

2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)芦荟多糖的制备

取库拉索芦荟鲜叶适量，洗净后去皮，芦荟凝胶清洗、切块，用搅拌机初步破 碎后置于闪式提取器进一步匀浆处理，得凝胶匀浆液；凝胶匀浆液减压抽滤，收集 滤液进行浓缩，浓缩液冷却后加入乙醇溶液，4℃冷藏过夜，离心得沉淀；待沉淀 中的乙醇挥干后，放入-40℃冰箱冷冻，然后置于真空冷冻干燥机中冻干，冻干粉研 磨，即得芦荟多糖；

(2)芦荟多糖GPC分析供试液的制备

精确称取步骤(1)制备的芦荟多糖适量，用NaNO₃溶液溶解后，在4℃冰箱 放置12h后取出，恢复至室温后用滤膜过滤，即得芦荟多糖GPC分析供试液；

(3)芦荟多糖的GPC分析

精密吸取步骤(2)制备的芦荟多糖GPC分析供试液，经凝胶渗透色谱仪分离 检测；其中，将ShodexSUGARKS-805色谱柱和KS-803色谱柱串联使用，流动相 为NaNO₃溶液，采用等度洗脱得到芦荟多糖的指纹图谱。

3.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，步骤(1)中所述的浓缩为 60℃旋蒸浓缩；所述的浓缩液冷却后加入乙醇溶液为浓缩液冷却后边搅拌边加入无 水乙醇至其体积分数为80％；所述的离心为10000rad/min离心15min。

4.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，步骤(2)中所述的芦荟多 糖GPC分析供试液的制备为：精确称取步骤(1)制备的芦荟多糖适量，用含质量 分数为0.2‰NaN₃的0.1mol/LNaNO₃溶液定容到7.0mg/mL，在4℃冰箱放置12h 后取出，恢复至室温后用0.22μm滤膜过滤，即得芦荟多糖GPC分析供试液。

5.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，步骤(3)中所述的芦荟多 糖的GPC分析的条件为：色谱柱为按照ShodexSUGARKS-805色谱柱在前，KS-803 色谱柱在后的顺序将两色谱柱串联使用；流动相为含质量分数为0.2‰NaN₃的0.1 mol/LNaNO₃溶液，洗脱速度为0.8ml/min；色谱柱和凝胶渗透色谱仪的示差折光检 测器的温度分别为60℃和50℃；进样量为50μL。

6.根据权利要求1-5任一项所述的构建方法得到的芦荟多糖标准指纹图谱，其 特征在于，比较同一产地不同批次或不同产地芦荟多糖样品的指纹图谱，确定共有 特征峰4个，以2号峰作为参照峰，计算指纹图谱中各特征峰的相对保留时间，各 特征峰的相对保留时间的相对标准偏差RSD均小于3％；即：

1号峰，平均相对保留时间为0.468，RSD为0.8～2.24％；

2号峰，平均相对保留时间为0.490，RSD为0；

3号峰，平均相对保留时间为0.508，RSD为0.01～0.02％；

4号峰，平均相对保留时间为0.523，RSD为0.02～0.06％。