[发明专利]一种人2号染色体新型快速FISH探针的制备方法及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种人2号染色体新型快速FISH探针的制备方法及其应用的制备方法及其应用。

背景技术

荧光原位杂交（FISH,fluorescenceinsituhybridization）是一项在体外直接观察细胞中特定核酸的技术。根据碱基互补配对的原则，特定的DNA序列与细胞内的目标序列互补结合。由于探针带有荧光，在合适的激发光照射下，杂交探针及目标DNA能够在荧光显微镜下被清楚地观察到，是一种直观有效的检测方法。

由于传统FISH探针序列的长度较大，导致所需要的杂交时间很长（一般是过夜杂16-18小时），不能及时的得到检测结果，这不利于临床的诊断及治疗。对FISH探针进行改进，缩短杂交时间，提高检测效率，有利于临床的诊断及治疗。

有必要研究出一种新型快速FISH探针的制备方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种人2号染色体新型快速FISH探针的制备方法及其应用。

本发明所采取的技术方案是：

人2号染色体新型快速FISH探针，包括FISH荧光探针，缓冲液和染色液，其中，2号染色体特异性探针的序列为：

探针1：TGTGCGCCCTCAACTAACAGTGTTG

探针2：ATATCTTCCCCTGAAAACTAGACAG

探针3：AGCAATGTCAGAAACTTTTTCATGA

探针4：CTCAGAAGCTTCATTGGGATGTTTC

探针5：AGTGGATATTTGTCTAGCTTTG

探针6：CCAATAAAAGCTACATAGA

探针7：GTGTTGAAGCATTCTTTTGA

上述检测试剂盒中的使用的探针中，2号染色体特异性探针连接的荧光基团为绿色荧光基团。

上述探针是在染色体上重复性高，特异性好的短序列。

上述探针所用缓冲液为：20mM～50mMTris-HCl（PH8.0～8.8），10mMMgCl₂，10%～30%甲酰胺。

上述探针的杂交温度为42℃，杂交时间为20分钟。

本发明的有益效果是：

本发明试剂盒，采用优化的短序列荧光探针，将原有的FISH检测时间由16～18小时缩短至1～2小时，可以快速、准确地检测出人2号染色体，对未来染色体异常快速检测方法的探究起指示性作用。

附图说明

图1是人2号染色体经本试剂盒荧光探针染色后的检验结果。

具体实施方式

实施例1：

一、人2号染色体新型快速FISH探针，包括FISH荧光探针，缓冲液和染色液，其中，人2号染色体特异性探针的序列如下，

探针1：TGTGCGCCCTCAACTAACAGTGTTG

探针2：ATATCTTCCCCTGAAAACTAGACAG

探针3：AGCAATGTCAGAAACTTTTTCATGA

探针4：CTCAGAAGCTTCATTGGGATGTTTC

探针5：AGTGGATATTTGTCTAGCTTTG

探针6：CCAATAAAAGCTACATAGA

探针7：GTGTTGAAGCATTCTTTTGA

其中，人2号染色体特异性探针连接的荧光基团为绿色荧光基团。该探针是在染色体上重复性高，特异性好的短序列。

实验时，加入100ul的缓冲液溶解探针干粉，缓冲液的成分为：20mM～50mMTris-HCl（PH8.0～8.8），10mMMgCl₂，10%～30%甲酰胺。

上述探针的杂交温度为42℃，杂交时间为20分钟。

二、FISH检测：

1.羊水样本处理

1)取≥5ml羊水转移到15ml的离心管（标记）中，2000rpm室温离心10分钟；

2)观察并记录沉淀情况，上清（约4ml）转移到新15ml离心管（标记），置4℃冰箱中保存；

3)沉淀加入5ml1xPBS并混匀，2000rpm室温离心10分钟，弃上清，管底留约1ml；

4)加入5ml的0.05%胰酶溶液，反复吹打混匀，37℃放置5-10分钟，2000rpm室温离心10分钟，弃上清，管底留约1ml；

5)加入5ml0.075MKCl，反复吹打混匀，37℃孵育20分钟；