[发明专利]一种红曲霉液态发酵制备ACE抑制肽的方法

说明书

本发明公开了一种红曲霉液态发酵制备ACE抑制肽的方法。本发明使用人工培养基进行液态发酵生产红曲霉菌丝体，再应用混合蛋白酶复合酶解法对红曲霉菌丝体中的蛋白质进行提取，即先利用碱性蛋白酶处理，再用木瓜蛋白酶和胃蛋白酶酶解红曲霉菌丝体中的蛋白质，并通过浓缩、真空冷冻干燥得到小分子活性多肽产品。通过对红曲多肽理化性质的测定及采用高效液相色谱法对其ACE抑制活性的研究，发现了红曲多肽具有较好的降血压功效，具有开发降血压保健食品的潜力。本发明的方法具有原料不受季节限制，操作简单、节约成本、减少环境污染、蛋白质提取率高和产品降血压活性好的优点。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种红曲霉液态发酵制备ACE抑制肽的方法。

背景技术

随着社会发展和人们生产、生活水平的提高，人口平均年龄增长，饮食结构改变，盐摄入量增高，以致高血压、高血压性心脏损害患病率增加。高血压不仅是一个独立的疾病，也是脑中风、冠心病、肾功能衰竭和眼底病变的重要危险因素，高血压患者还常常伴有糖尿病等慢性疾患。有效地预防并控制高血压对人体健康具有重要意义。

降血压肽，又称为血管紧张素转化酶(Angioensin I Converting Enzyme，简称ACE)抑制肽，是从食物蛋白中分离出的一类具有显著降低血压功效的多肽短链物质。这些来源于食品的降血压肽通常由蛋白酶在温和条件下水解蛋白质而获得，食用安全性高，其共同突出优点是只对高血压患者起到降压作用，对血压正常者无降压作用，因而不会有降压过度现象发生。

红曲霉菌丝体的重量占发酵液重量的20%左右，红曲霉菌丝体中富含对人体有保健作用的有益物质，如具有降血压功能的Monacolin K，丰富的必需氨基酸、不饱合脂肪酸，35%-40%的蛋白质等物质。红曲菌丝中的这些有益物质多为不饱和脂肪酸和菌体组织蛋白质，其中的菌体组织蛋白质结构松软，容易消化吸收，尤其适合儿童，老人和病人食用，具有较高的营养保健价值。

现阶段我国的红曲生产主要以大米为原料，以固态发酵的方式进行，目前已有酶法处理固态发酵红曲霉菌渣从中回收蛋白多糖等物质的报道。然而，通过液态发酵制备纯净的红曲霉菌丝体，并使用酶解法从菌体蛋白中得到具有ACE抑制活性的多肽粉剂的方法尚未见报道。

发明内容

本发明的一个目的在于克服现有红曲霉菌丝体再利用的技术不足，提供一种采用红曲霉菌丝体制备可溶性ACE抑制肽的方法。

使用人工培养基进行液态发酵生产红曲霉菌体，再应用混合蛋白酶复合酶解法对红曲霉菌丝体中的蛋白质进行提取，生产出安全纯净的具有ACE抑制活性的红曲多肽产品。通过对红曲多肽理化性质的测定及采用高效液相色谱法对其ACE抑制活性的研究，发现了红曲多肽具有较好的降血压功效，具有开发降血压保健食品的潜力。

本发明采用的红曲霉已于2013年3月13日保藏，保藏单位：中国典型培养物保藏中心（CCTCC），中国.武汉.武汉大学，保藏编号：CCTCC NO:M2013082，分类命名：红色红曲霉SE1703 Monascus rubber SE1703。

本发明的目的通过下述技术方案予以实现：

提供一种红曲霉液态发酵制备ACE抑制肽的方法，包括以下步骤：

（1）红曲霉液态发酵：使用斜面活化培养基培养红曲菌种，进行活化；取培养后的斜面种子一支，将菌体及孢子洗脱至生理盐水中制成混合液，按 10%的接种量接种到装有二级液体种子培养基，于 200rpm，30℃培养 48h~72h；将二级液体种子按 10%的接种量接种到发酵培养基中于 30℃，200rpm 培养5d，得到红曲霉菌丝体；

（2）获得菌体干粉：用去离子水清洗红曲霉菌丝体，冷冻干燥得到菌体干粉；