[发明专利]一种使用专属性肽段组鉴别梅花参的方法

说明书

本发明涉及一种使用专属性肽段组鉴别梅花参(Thelenota ananas)的方法，以及一组用于通过质谱法鉴定梅花参的对照多肽，所述多肽的序列为：SEQ ID NO.1：ADIAEDSLK；SEQ ID NO.2：AGPAGDDAPR；SEQ ID NO.3：MPIPLLEGK；SEQ ID NO.4：LDIPLLEGK。经鉴定:SEQ ID NO.1：ADIAEDSLK所述肽段为梅花参专有肽段，在其他物种中未见表达；SEQ ID NO.2：AGPAGDDAPR；SEQ ID NO.3：MPIPLLEGK；SEQ ID NO.4：LDIPLLEGK所述肽段虽在其他物种中存在，但在刺参、海地瓜、美国肉参、墨西哥参、美国肉参中未见表达，上述肽段为梅花参专有肽段。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体而言，涉及一种使用专属性肽段组鉴别梅花参(Thelenota ananas)的方法。

背景技术

海参富含酸性黏多糖，对人体有免疫调节剂、抗凝血、控制血糖和降血脂等功效。故此，海参享有“营养宝库”之美誉，现代人把海参誉为“海味八珍之首”。市场上海参种类繁多，不同海参因其营养价值、口感等不同而价格相差巨大，梅花参(Thelenota ananas)同灰刺参一样经济价值很高，既是滋补品，又可治病抗癌，有一定的防衰老作用，含有较高的蛋白质，矿物质也较丰富，并且不含胆固醇，是理想的滋补品。中医认为：海参性温，味成，有补肾益精、养血润燥之功，可以治精血亏损、虚弱劳怯、阳痿、肠燥便艰等症。对于产后、病后体虚衰老，肺结核，神经衰弱等症，均可用之。

不同品种的海参相比较，有的粘多糖含量高，对心脑血管有好处；有的皂甙含量高，对抗癌有益。海参同人参一样，如果皂甙含量高，则药用价值高，但可能味道不好；而有的海参蛋白质含量高，如茄参和刺参，可以大量用在宾馆和家庭餐桌上，对蛋白质缺乏、营养不良的人群提供身体所需的营养物质。

由于目前缺乏特别有效的识别海参品种的方法，鉴别海参种类的方法还只是靠传统的外观观察，缺乏技术水平的支持，导致不少不良商人以次充好、以假充真欺骗消费者，因此需要一种高效准确的鉴定海参的方法。

发明内容

本发明对梅花参(Thelenota ananas)的多肽进行了研究，建立了从多肽水平对梅花参进行鉴别的技术，填补了国内外海参鉴别的空白。

本发明首先涉及一组用于单独或组合检测梅花参的多肽，所述的多肽的序列为：

SEQ ID NO.1：ADIAEDSLK；

SEQ ID NO.2：AGPAGDDAPR；

SEQ ID NO.3：MPIPLLEGK；

SEQ ID NO.4：LDIPLLEGK。

本发明还涉及一种检测梅花参的方法，所述方法包括如下步骤：

(1)对待测样本进行质谱前处理，获得待测多肽滤液：

(2)通过质谱法检验待测样本的多肽成分，分析样本中的梅花参成分。

所述的质谱前处理步骤如下：

(1)称取1g海参样品均质成粉末状态，加入10mL蛋白提取液(8M尿素，50mMNH₄HCO₃)震荡提取蛋白，高速低温离心(20000r/min)，取上清液200ul转移到1ml EP管中；

(2)取2μL 1mol/L DTT(0.154g二硫基苏糖醇DTT溶于1mL去离子水中)加入到100μL上述蛋白溶液中37℃反应1小时；

(3)取10μL现配的IAA(准确称取0.185g碘代乙酰胺IAA溶于1mL去离子水中，配置成1mol/L的IAA母液备用，配置过程需避光，现用现配)加入到已经冷却至室温的上述反应液中，室温避光反应1小时；