[发明专利]一株高产厚垣孢子的绿色木霉及其应用有效
申请号: | 201510501313.X | 申请日: | 2015-08-14 |
公开(公告)号: | CN105062897B | 公开(公告)日: | 2018-02-23 |
发明(设计)人: | 牛赡光;张芳;李鹏;李泉涌;张淑静 | 申请(专利权)人: | 潍坊万胜生物农药有限公司 |
主分类号: | C12N1/14 | 分类号: | C12N1/14;A01N63/04;A01P3/00;C12R1/885 |
代理公司: | 济南诚智商标专利事务所有限公司37105 | 代理人: | 韩百翠 |
地址: | 261057 山东省*** | 国省代码: | 山东;37 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 高产 孢子 绿色 及其 应用 | ||
技术领域
本发明属于生物防治植物病害领域。具体而言,本发明涉及一种高产厚垣孢子的绿色木霉菌株及其应用。
背景技术
木霉(Trichoderma spp.),属于半知菌类的丝孢纲、丛梗孢目、丛梗孢科,是一类广泛分布于土壤、空气、枯枝落叶及各种发酵物上的真菌,从植物根圈、叶片及种子、球茎表面均可以分离到。木霉通过产生抗生素、营养竞争、重寄生、细胞壁降解酶以及诱导植物产生抗性等机制,对于多种植物病原菌具有拮抗作用,可抑制多种植物病害,是目前生防菌株中研究最为广泛的菌株之一。木霉对植物病原菌的生物防治机制是多样而复杂的,常常是多种机制共同作用的结果,不同的菌株生防机制的侧重点不同,其生防作用效果与菌株类型、病原真菌的类型、作物类型和环境条件密切相关。但由于木霉菌孢子不具备抗逆性,在高温、干燥和强光下就会死亡,失去抑菌活性。实验表明,一般不经过特殊处理的木霉菌孢子,在常温下(25℃),相对湿度80%,存活时间只有12天,添加保水剂和紫外线防护剂,其存活时间只有2个月。因此,获得具有产生抗逆性很强的厚垣孢子产生菌就具有特殊意义。
发明内容
本发明的目的是提供一种高产厚垣孢子的绿色木霉菌株TW12,该菌株不仅能够产生抗逆性很高的厚垣孢子,而且对黄瓜灰霉病、菌核病和柑橘炭疽病都具有很高防治效果。本发明的绿色木霉菌株不仅生长速度快、产孢量大、作用谱广,而且厚垣孢子生成率超过45%,大大增加了抗逆性,储存时间长,且具有在黄瓜叶片、柑橘叶片能够快速大量定殖等特点,因此具有良好的应用前景。
本发明所提供的菌株为绿色木霉(Trichoderma viride)菌株TW12,是从潍坊北部渤海滩涂潮间带的枯木上分离获得的,已于2015年7月6日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC,地址:北京市朝阳区北辰西路1号院3号,中国科学院微生物研究所),保藏编号为CGMCC No.11048。其具有以下生物学特性:在PDA琼脂培养基上生长快,32℃黑暗条件下培养2d,菌落直径75mm。菌落初期白色稀疏,后期形成黄绿色产孢区,3d即形成大量绿色孢子。反面无色。菌丝聚隔,分枝。分生孢子梗形成松柏式的分枝轮廓,分枝末端的小梗束生、对生、互生或单生,瓶形,4.5-10×2.5-3.5μm。分生孢子椭球形、单个,近无色,聚集时呈淡绿色,壁稍粗糙,3.5-5×3-4μm。
本发明绿色木霉菌株TW12的培养方法或繁殖方法包括:
(1)普通培养保存采用PDA培养基,配方为:马铃薯200g,葡萄糖20g,琼脂12g,蒸馏水1000mL;
(2)实验室液体培养采用PDB培养基,配方为:马铃薯200g,葡萄糖20g,蒸馏水1000mL;
(3)固体培养基配方:固料和无机盐溶液,所述固料和无机盐溶液的质量比为1:1.8;所述固料由质量比为60:10:30的木粉、玉米粉和麸皮组成;按质量百分比计,所述无机盐溶液的组分及含量为:3.5%磷酸二氢钾,0.05%硫酸镁,0.5%硫酸钙,4%硫酸铵,0.05%氯霉素,1.3%轻质碳酸钙,剩余为水。
(4)大量发酵培养基配方:同(3)中固体培养基配方。
本发明还提供了一种含有所述绿色木霉菌株TW12的生物防治制剂。
本发明所述的生物防治制剂的制备方法包括以下步骤:
(1)制备所述绿色木霉菌株TW12的种子液;
(2)将步骤(1)制备的种子液接种到固体培养基中,28-30℃下恒温培养3~5d;
(3)将步骤(2)培养的培养物加入无菌水混合,过滤,将滤液接种至大量发酵培养基,在室温28-30℃、相对湿度85%以上的发酵室中进行发酵培养。
其中,步骤(2)中的固体培养基由固料和无机盐溶液组成,所述固料和无机盐溶液的质量比为1:1.8;所述固料由质量比为60:10:30的木粉、玉米粉和麸皮组成;按质量百分比计,所述无机盐溶液的组分及含量为:3.5%磷酸二氢钾,0.05%硫酸镁,0.5%硫酸钙,4%硫酸铵,0.05%氯霉素,1.3%轻质碳酸钙,剩余为水。
并且,步骤(3)中的大量发酵培养基同固体培养基。
在本发明的一个具体实施方案中,所述制备方法包括以下步骤:
(1)将所述绿色木霉菌株TW12的孢子移植到PDB液体培养基中,28-30℃摇床振荡培养2~3d得到种子液;PDB液体培养基配方:马铃薯200g,葡萄糖20g,水1000mL;
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