[发明专利]一种中东呼吸综合征冠状病毒ORF1a2基因检测试剂盒

权利要求书

1.一种环介导等温扩增技术的中东呼吸综合征冠状病毒核酸检测方法，利用环介导等温扩增技术来进行，其特征在于，通过使用特异性引物，利用LAMP技术平台扩增靶基因ORF1a2基因的特定区域，在阳性和阴性质控和内对照检测体系的辅助下，从分子水平对样本中的中东呼吸综合征冠状病毒进行筛查或检测。

2.根据权利要求1所述的基于环介导等温扩增技术的中东呼吸综合征冠状病毒核酸筛查方法，其特征在于所述的LAMP技术平台扩增靶基因的特定区域是指中东呼吸综合征冠状病毒ORF1a2基因的特定靶核酸序列区域。

3.根据权利要求1所述的基于环介导等温扩增技术的中东呼吸综合征冠状病毒核酸筛查方法，其特征在于所述的阴阳性对照检测体系中，阳性对照质控品为相同于扩增冠状病毒靶基因ORF1a2的RNA，阴性对照质控品为不相同于扩增冠状病毒靶基因ORF1a2的RNA，并使用时间分辨浊度法或Smartgreen荧光染料紫外灯下显色法同时检测阴阳对照和中东呼吸综合征冠状病毒靶基因扩增产物。

4.根据权利要求1所述的基于环介导等温扩增技术的中东呼吸综合征冠状病毒核酸筛查方法，其特征在于，所述的特异性引物为：

FOP：GTTTGCACTTATGCCATC

BOP：TCATAGACACCCATAGGTGC

FIP：ATAATAAAAGTATCATCTTCTTTTTTGCTTACTCACCACAGC

BIP：CACATGTTTAGGTTTCATGTTTTTTAAGCTTAAGGTTCAAAGAGA

FLP：CTTCCGGAAACACAAGTGTA

BLP：ACTTGCTATTTGGTGTC。

5.根据权利要求1所述的基于环介导等温扩增技术的中东呼吸综合征冠状病毒核酸筛查方法，其特征在于，所用的LAMP反应体系是由下述一系列通过优化的反应成分组成：

FIP/BIP0.2-2μmol/L

FOP/BOP0.1-1μmol/L

FLP/BLP0.1-1μmol/L

10X的BstDNA聚合酶反应体系buffer2.5μL

10mM脱氧核糖核苷酸dNTP0.5-1.5μL

氯化镁25mMMgCl₂4.5μL

BstDNA聚合酶1.0μL

模板2.0μL

超纯水补至25μL。