[发明专利]一株侧耳木霉及其应用

说明书

技术领域

本发明属于生物防治植物病害领域。具体而言，本发明涉及一种能够高效防治植物病害的侧耳木霉菌及其用途，以及采用该侧耳木霉菌制备的生物防治制剂。

背景技术

木霉(Trichoderma spp.)，属于半知菌类的丝孢纲、丛梗孢目、丛梗孢科，是一类广泛分布于土壤、空气、枯枝落叶及各种发酵物上的真菌，从植物根圈、叶片及种子、球茎表面均可以分离到。木霉是自然界普遍存在并有丰富资源的拮抗微生物。木霉菌生长繁殖速度快，能够迅速占领营养空间，可分泌产生抗生素抑制其他病原菌生长，还可以通过营养竞争、重寄生、细胞壁降解酶以及诱导植物产生抗性等作用机制，达到抑制病害的目的，是生防菌株中研究最为广泛的菌株之一。目前已经发现的木霉菌30多个种中的许多具有生防潜力，如绿色木霉、哈茨木霉、康宁木霉、刺孢木霉和侧耳木霉等，对18个属29种植物病原菌表现出拮抗活性。木霉对植物病原菌的生物防治机制是多样而复杂的，常常是多种机制共同作用的结果，不同的菌株生防机制的侧重点不同，其生防作用效果与菌株类型、病原真菌的类型、作物类型和环境条件密切相关。

本发明发明人曾分离到一种高效解磷的耐盐侧耳木霉菌(专利申请号：201310442613.6)。但是，侧耳木霉用于防治辣椒枯萎病、板栗枝枯病、石榴干腐病等土传病害，还未见报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种用于高效防治多种植物病害的新的木霉菌株——侧耳木霉菌株QZ-001H。本发明的侧耳木霉菌株具有生长速度快、产孢量大、作用谱广、抗逆性强，在植物根际能够快速大量定殖等特点，因此具有良好的应用前景。

本发明的上述目的是通过以下技术方案实现的：本发明所提供的侧耳木霉(Trichoderma pleuroticola)菌株QZ-001H，是从青岛市黄岛区浅海礁石的海藻(表层获得)中分离获得的，已于2015年7月6日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所)，保藏编号为CGMCC No.11049。其具有以下生物学特性：在PDA培养基上，25℃黑暗条件下培养7天，菌落直径扩展80mm，初期白色稀疏，后变为灰绿色，絮状。反面无色。菌丝具隔，分枝。分生孢子梗便形成松柏式的分枝轮廓，分枝末端的小梗束生、对生、互生或单生，瓶形，6-10×3-4.5μm。分生孢子椭球形、单个、近无色，聚集时呈淡黄绿色，壁光滑或稍粗糙，4-5.5×3-4μm。

本发明侧耳木霉菌株QZ-001H的培养方法或繁殖方法包括：

(1)普通培养保存采用PDA培养基，配方为：马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂12g，蒸馏水1000mL；

(2)实验室液体培养采用PDB培养基，配方为：马铃薯200g，葡萄糖20g，蒸馏水1000mL。

(3)固体培养基配方：固料和无机盐溶液，按质量比1：1.8的比例配制。其中所述固料由质量比为50:40:10的玉米芯、麸皮和稻壳组成；按质量百分比计，所述无机盐溶液的组分及含量为：3.5％磷酸二氢钾，0.04％硫酸镁，4％硫酸铵，剩余为水。

(4)大量发酵培养配方：同(3)中固体培养基配方。

本发明还提供一种包括所述的侧耳木霉菌株QZ-001H的生物防治制剂。

本发明还提供了上述生物防治制剂的制备方法，包括以下步骤：

(1)制备侧耳木霉菌株QZ-001H的种子液；

(2)将步骤(1)制备的种子液接种到固体培养基中，28-30℃下恒温培养3～5天；

(3)将步骤(2)培养的培养物加入无菌水混合，过滤，将滤液接种至大量发酵培养基，在室温28-30℃、相对湿度85％以上的发酵室中进行发酵培养。

其中，步骤(2)中的固体培养基由固料和无机盐溶液组成，按质量比1：1.8的比例配制；其中所述固料由质量比为50:40:10的玉米芯、麸皮和稻壳组成；按质量百分比计，所述无机盐溶液的组分及含量为：3.5％磷酸二氢钾，0.04％硫酸镁，4％硫酸铵，剩余为水。

并且，步骤(3)中的大量发酵培养基同固体培养基。

在本发明的一个具体实施方案中，所述制备方法包括以下步骤：

(1)将侧耳木霉菌株QZ-001H的孢子移植到PDB液体培养基中，28℃摇床振荡培养3～5天得到种子液；

(2)将步骤(1)制备的种子液按质量比10％的比例接种到固体培养基中，28℃下振荡培养3～5天；