[发明专利]一株简单芽孢杆菌及其应用

说明书

技术领域

本发明属于生物防治植物病害领域。具体而言，本发明涉及一株能够高效防治植物病害的芽孢杆菌及其用途，以及采用该芽孢杆菌制备的生物防治制剂。

背景技术

植物病害是植物在生物或非生物因子的影响下，发生一系列形态、生理和生化上的病理变化，阻碍了正常生长、发育的进程，从而影响人类经济效益的现象。目前对于植物病害的防治，常规采用的方法包括传统的化学防治、培育抗病品种以及生物防治。抗病品种培育周期长，抗性单一，而化学防治，极易造成农药残留，环境污染；同时，化学农药的长期使用，使得病原菌对其产生抗药性，导致防效下降甚至失败。因此，利用有益微生物防治植物病害具有广阔的前景。

芽孢杆菌(Bacillus)，在分类上是细菌的一个科，能形成芽孢(内生孢子)的杆菌或球菌。包括芽孢杆菌属、芽孢乳杆菌属、梭菌属、脱硫肠状菌属和芽孢八叠球菌属等。形成芽孢后，它们对外界有害因子抵抗力强，分布广，存在于土壤、水、空气以及动物肠道等处。由于它们代谢快、繁殖快，四小时增殖10万倍；生命力强，耐受性好；体积大，占据空间优势，抑制有害菌的生长繁殖等优势而备受瞩目。芽孢杆菌是植物病害生防微生物的重要组成部分，可用于防治多种植物病害。芽孢杆菌作为生防菌防治植物病害的机制主要有：抗生作用、营养竞争、空间竞争、重寄生作用以及诱导植物产生抗性等机制，芽孢杆菌的生防机制主要是以产生拮抗物质抑制有害病菌的生长或杀死病原菌。这些物质绝大多数为肽类抗生素，具有高效、低残留、与环境友好等优点。

发明内容

本发明的目的是提供一种用于高效防治多种植物病害的新的微生物——简单芽孢杆菌菌株STY005。本发明的芽孢杆菌菌株具有直径长、耐低氧、作用谱广、适应性强，在低营养下即可快速生长繁殖等特点，因此具有良好的应用前景。

本发明所提供的菌株为简单芽孢杆菌(Bacillus simplex)STY005，是从山东省林业科学院苗圃中分离获得的，已于2015年7月6日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所)，保藏编号为CGMCC No.11052。其具有以下生物学特性：在牛肉膏蛋白胨琼脂培养基或LB培养基上菌落形态为圆形或不规则形，乳白偏黄色，表面粗糙起褶皱，在牛肉膏蛋白胨琼脂培养基上，28℃下培养两天后，镜检，菌体细胞呈杆状，能运动。经革兰氏染色呈阳性(以大肠杆菌为对照)。经芽孢染色后观察芽孢呈椭圆形或柱状。

本发明简单芽孢杆菌菌株STY005的培养方法或繁殖方法包括：

(1)普通培养保存采用LB培养基，配方为：胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，氯化钠10g，琼脂15-20g，蒸馏水1000mL，pH调至7.1-7.4；

(2)实验室液体培养采用LB液体培养基，配方为：胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，氯化钠10g，蒸馏水1000mL，pH调至7.1-7.4；

(3)固体培养基配方：固料和无机盐溶液，按质量比1：1.8的比例配制。其中所述固料的组分及重量比为：玉米面75％，豆粕10％，麸皮15％；按质量百分比计，所述无机盐溶液的组分及含量为：磷酸二氢钾3.5％，硫酸镁0.04％，硫酸铵4％，剩余为水。

(4)大量发酵培养基配方：同(3)中固体培养基配方。

本发明还提供了一种生物防治制剂，包括所述的简单芽孢杆菌菌株STY005。

上述生物防治制剂的制备方法，包括以下步骤：

(1)制备简单芽孢杆菌菌株STY005的种子液；

(2)将步骤(1)制备的种子液接种到固体培养基中，28～30℃下恒温培养3～5d；

(3)将步骤(2)培养的培养物加入无菌水混合，过滤，将滤液接种至大量发酵培养基，在室温28～32℃、相对湿度85％以上的发酵室中进行发酵培养。

优选的，所述制备方法包括以下步骤：

(1)将简单芽孢杆菌的孢子移植到LB液体培养基中，28～30℃摇床振荡培养3～5d得到种子液；

(2)将步骤(1)制备的种子液按质量比10％的比例接种到固体培养基中，28～30℃下恒温振荡培养3～5d；

(3)将步骤(2)培养的培养物加入无菌水按质量比1：15的比例混合，过滤，将滤液按体积比1：6的比例接种至大量发酵培养基，室温28～32℃、相对湿度85％以上的发酵室中发酵培养8～9d。