[发明专利]马鲛鱼超低温冷冻精液的复苏方法

说明书

技术领域

本发明涉及超低温冷冻精液的解冻复活方法，具体涉及马鲛鱼超低温冷冻精液的复苏方法。

背景技术

马鲛鱼属鲈形目，鲅科，是一种重要的海洋经济鱼类。虽然马鲛鱼人工繁殖和养殖难度较大，但目前已获得初步成果。马鲛鱼批量人工繁殖中，对马鲛鱼精液的保存和复活也是关健点。鱼类精液的保存方法多种多样，如4℃常温保存，低温保存，超低温冷冻保存等，超低温冷冻保存不但精子保存时间长，且精子质量变化很少，但超低温冷冻保存时精子复苏难度较大，目前只有家畜的冷冻精液解冻复苏的报道，如公开号为CN104322484的发明专利申请，就公开了先以50℃/min的速率，将冻存精液升至-5℃，再以3℃/min的速率将冻存精液升至5℃，得到复苏的猪精子。但鱼类精子生命力较弱，常规的解冻对鱼类精子损伤较大，因此需要进一步研究后才能应用，还没有鱼类及马鲛鱼超低温冷冻精液的复苏方法方面的研究报道。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种马鲛鱼超低温冷冻精液的复苏方法，该复苏方法使冷冻精液中精子损伤较少，精子复苏率可以达到85%以上。

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：马鲛鱼超低温冷冻精液的复苏方法，步骤如下：

a、将装有马鲛鱼超低温冷冻精液的冻存管从液氮中取出，放入40～50℃恒温水浴

中，摇动冻存管，至冻存管中马鲛鱼超低温冷冻精液完全溶解，取出冻存管，得到解冻后的马鲛鱼精液；

b、将解冻后的马鲛鱼精液与精子复苏液按体积比1：100的比例混合，静置温养2～3min，得到复苏的马鲛鱼精子，所述精子复苏液为温度18～20℃，pH7.6～8.4，盐度20～30‰的纯净海水。

与现有技术相比，本发明的优点在于马鲛鱼超低温冷冻精液的复苏方法，该复苏

方法先将马鲛鱼超低温冷冻精液在恒温水浴中解冻，再用精子复苏液温养解冻后的马鲛鱼精子，使复苏后的精子活率可以达到新鲜精子的水平，解冻复苏过程中精子损伤较少，精子复苏率可以达到85%以上。

具体实施方式

以下结合实施例对本发明作进一步详细描述。

实施例1

马鲛鱼超低温冷冻精液的复苏方法，将装有马鲛鱼超低温冷冻精液的冻存管从液氮中取出，放入45℃恒温水浴中，摇动冻存管，至冻存管中马鲛鱼超低温冷冻精液完全溶解（一般2min左右），取出冻存管，得到解冻后的马鲛鱼精液，将解冻后的马鲛鱼精液与精子复苏液（温度19℃，pH8.0，盐度25‰的纯净海水）按体积比1：100的比例混合，静置温养2.5min，得到复苏的马鲛鱼精子，检测后精子活率可以达到新鲜精子相当，统计后精子复苏率达到88%以上。

实施例2

马鲛鱼超低温冷冻精液的复苏方法，将装有马鲛鱼超低温冷冻精液的冻存管从液氮中取出，放入40℃恒温水浴中，摇动冻存管，至冻存管中马鲛鱼超低温冷冻精液完全溶解（一般2min左右），取出冻存管，得到解冻后的马鲛鱼精液，将解冻后的马鲛鱼精液与精子复苏液（温度18℃，pH8.4，盐度30‰的纯净海水）按体积比1：100的比例混合，静置温养3min，得到复苏的马鲛鱼精子，检测后精子活率可以达到新鲜精子相当，统计后精子复苏率达到86%以上。

实施例3

马鲛鱼超低温冷冻精液的复苏方法，将装有马鲛鱼超低温冷冻精液的冻存管从液氮中取出，放入50℃恒温水浴中，摇动冻存管，至冻存管中马鲛鱼超低温冷冻精液完全溶解（一般2min左右），取出冻存管，得到解冻后的马鲛鱼精液，将解冻后的马鲛鱼精液与精子复苏液（温度20℃，pH7.6，盐度20‰的纯净海水）按体积比1：100的比例混合，静置温养2min，得到复苏的马鲛鱼精子，检测后精子活率可以达到新鲜精子相当，统计后精子复苏率达到85%以上。