[发明专利]亚硝酸菌的高通量筛选方法

权利要求书

1.亚硝酸菌的高通量筛选方法，使用的接种影印工具，包括圆盘状、同样大小的底板、中间板和面板，它们通过边缘上均匀分布的四根不锈钢螺丝固定，在四根不锈钢螺丝外套铜螺柱，底板、中间板、面板的中心与一手柄通过螺母固定连接；在中间板和面板上有1448个小孔，有10~1448根平头不锈钉穿过中间板和面板的小孔，且钉头在底板和中间板之间可上下移动；其特征在于：具体过程包括如下步骤：

(1)平板影印接种菌

取在121℃的温度下灭菌的10cm培养皿放入洁净工作台中紫外线照射30分钟，取黑臭河水倒入清洁的灭菌培养皿内，用所述接种影印工具沾取菌悬液后放置于事先制备好的经灭菌的10cm培养皿上， 用记号笔在接种影印工具定位孔对应的培养皿边缘做定位孔标记，盖上平皿盖25℃倒置培养；

(2)平板影印传代

待菌落明显又尚未黏连融合时，采用无菌操作，用同一接种影印工具的定位孔对准培养皿上的定位孔标记，放下接种影印工具，不锈平头钉上将沾染原平板上对应的菌落，再转印于另一个经灭菌的黑臭河水平板上进行传代，盖上皿盖25℃倒置培养，将原代平板于4℃保藏待用；

(3)亚硝酸菌菌落识别

用直径95mm的玻璃纤维滤膜浸润亚硝氮显色液后，将其紧贴至子代平板表面，记录贴膜10分钟时有红色色斑出现的菌落，在原代平板上挑取相同或相应位置的菌落，采用平板划线法分离纯化亚硝酸菌。

2.根据权利要求1所述的方法，特征在于：采用以铵氮为唯一氮源的培养基，结合接种影印工具接种1次获得原代平板，再传代1次获得子代平板。

3.根据权利要求1所述的方法，特征在于：采用贴膜法使显色剂与子代平板上的菌落接触，在30分钟内观察菌落显色反应直观识别阳性菌落，再从原代平板上挑取相应位置的原代菌落进行划线纯化。