[发明专利]一种嗜热毛壳菌纤维素酶在抛光染色一浴工艺中的应用

权利要求书

1.一种嗜热毛壳菌纤维素酶在抛光染色一浴工艺中的应用，其特征在于，在盐浓度为10g/L～90g/L和温度为57～63℃条件下使用所述嗜热毛壳菌纤维素酶和染料进行抛光染色一浴，所述嗜热毛壳菌纤维素酶按如下方法制得：

1)嗜热毛壳菌纤维素酶基因的合成，合成的嗜热毛壳菌纤维素酶基因的序列如SEQ ID NO.2所示,合成的基因编码更加符合里氏木霉高效表达的基因编码；

2)嗜热毛壳菌纤维素酶表达质粒的构建；

3)里氏木霉的转化与嗜热毛壳菌纤维素酶高产菌株的筛选，得到的嗜热毛壳菌纤维素酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，分泌到细胞外的嗜热毛壳菌纤维素酶为SEQ ID NO.3所示序列的第22-314位氨基酸序列；步骤3)具体为：首先，用EcoRI降解步骤2)构建的质粒形成质粒片段，采用化学转化方法将该质粒片段转入里氏木霉RUT C-30宿主细胞；然后在含有潮霉素B的PDA培养基上培养，再将生长旺盛的菌落接种置PDA培养基上，通过生长和发芽，将孢子再转移到新鲜PDA培养基上，以分离纯化转代稳定的转化子，将这些转化子的孢子接种在木霉纤维素酶诱导培养液，培养后，采样离心，取上清液进行SDS-PAGE电泳分析；所述木霉纤维素酶诱导培养液的pH值为4.8，用乳糖作为诱导物。

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述盐为NaCl、Na₂SO₄中的一种或多种。

3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述嗜热毛壳菌纤维素酶在抛光染色一浴中的最适作用温度为60℃。

4.一种嗜热毛壳菌纤维素酶在抛光染色一浴工艺中的应用，其特征在于，在盐浓度为10g/L～90g/L和温度为57～63℃条件下使用所述嗜热毛壳菌纤维素酶和染料进行抛光染色一浴，所述嗜热毛壳菌纤维素酶按如下方法制得：

1)嗜热毛壳菌纤维素酶基因的合成，合成的嗜热毛壳菌纤维素酶基因的序列如SEQ ID NO.4所示；

2)嗜热毛壳菌纤维素酶表达质粒的构建；

3)毕赤酵母的转化与嗜热毛壳菌纤维素酶高产菌株的筛选，得到的嗜热毛壳菌纤维素酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示；步骤3)具体为：首先，用Spe I限制性内切酶将步骤2)构建的表达质粒切开后，直接转化毕赤酵母菌；随即挑选多个白色毕赤酵母菌落、培养、诱导后，将菌体与培养液分离，培养液通过SDS-PAGE电泳分析。

5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述盐为NaCl、Na₂SO₄中的一种或多种。

6.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述嗜热毛壳菌纤维素酶在抛光染色一浴中的最适作用温度为60℃。