[发明专利]间充质干细胞的三维共培养诱导方法

权利要求书

1.一种间充质干细胞的三维共培养诱导方法，其特征在于，包括以下步骤：

分别获取间充质干细胞和目的细胞源；

将间充质干细胞与含有磁性氧化物颗粒的可溶性的海藻酸盐A混合后，再与除镁离子以外的二价金属离子盐溶液A混合，至形成凝胶球A；

将目的细胞源与可溶性的海藻酸盐B混合后，再与除镁离子以外的二价金属离子盐溶液B混合，至形成凝胶球B；

用诱导剂对所述凝胶球A内的间充质干细胞和凝胶球B中的目的细胞源进行共培养至间充质干细胞转化为目的细胞，然后将凝胶球A和凝胶球B置于磁场中进行分离；

其中，磁性氧化物颗粒的直径为1-100nm。

2.根据权利要求1所述的间充质干细胞的三维共培养诱导方法，其特征在于，所述凝胶球A的形成过程为：将所述间充质干细胞与含有磁性氧化物颗粒的可溶性的海藻酸盐A混合后，匀速加入除镁离子以外的二价金属离子盐溶液中。

3.根据权利要求1所述的间充质干细胞的三维共培养诱导方法，其特征在于，所述凝胶球A内的间充质干细胞与凝胶球B中的目的细胞源进行共培养之前，还包括采用培养液清洗凝胶球A和凝胶球B的步骤。

4.根据权利要求1所述的间充质干细胞的三维共培养诱导方法，其特征在于，所述磁场的最大磁能积为35MGOe。

5.根据权利要求1所述的间充质干细胞的三维共培养诱导方法，其特征在于，所述磁性氧化物颗粒为Fe₃O₄或Co₃O₄颗粒；且所述海藻酸盐A中，磁性氧化物的浓度为2-10mg/ml。

6.根据权利要求1所述的间充质干细胞的三维共培养诱导方法，其特征在于，所述海藻酸盐A和海藻酸盐B均为海藻酸钠或海藻酸钙；与间充质干细胞混合后，海藻酸盐A的浓度为2％-10％W/V；与目的细胞源混合后，海藻酸盐B的浓度为2％-10％W/V。

7.根据权利要求1所述的间充质干细胞的三维共培养诱导方法，其特征在于，所述二价金属离子盐溶液A和二价金属离子盐溶液B均为氯化钙溶液，且氯化钙的浓度均为1％-5％W/V。

8.根据权利要求1所述的间充质干细胞的三维共培养诱导方法，其特征在于，所述目的细胞源为软骨细胞源；且对所述凝胶球A内的间充质干细胞和凝胶球B中的目的细胞源进行共培养的步骤中，所述间充质干细胞与所述软骨细胞源的浓度比为1:1-3:1。

9.根据权利要求7所述的间充质干细胞的三维共培养诱导方法，其特征在于，所述诱导剂包括5-15ng/ml的TGF-β、7-10mmol/l地塞米松、50-100ug/ml抗坏血酸、5-15mmol/l甘油磷酸钠和50-150ng/ml的ITS+Premix。

10.根据权利要求1所述的间充质干细胞的三维共培养诱导方法，其特征在于，对所述凝胶球A中的间充质干细胞和凝胶球B中的目的细胞源共培养的过程是在生物反应器中进行的。