[发明专利]细胞诱导培养基及诱导培养间充质干细胞的方法

说明书

技术领域

本发明涉及组织工程技术领域，特别涉及一种诱导培养基及诱导培养间充质干细胞的方法。

背景技术

间充质干细胞是一种具有多向分化潜能的细胞，它能够定向诱导为胰岛样细胞、软骨细胞等多种细胞。且间充质细胞存在于人体多种组织中，尤其是脐带、胎盘、骨髓、脂肪组织来源的间充质干细胞，具有来源广泛、易于采集、无伦理问题等优势，可规模化诱导分化为软骨细胞，为临床治疗关节软骨损伤提供新的技术方案。但目前多采用间充质干细胞与软骨细胞共培养的方式诱导间充质干细胞转化为软骨细胞，这种共培养方法不仅需要一定的软骨细胞源，过程较繁琐，花费较大，而且所获得的更多为散在软骨细胞，数量较少，软骨细胞团几乎没有，而且散在的软骨细胞相对较小，细胞活性差，难以达到临床移植要求。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是，针对现有技术中利用间充质干细胞和软骨细胞共培养方式诱导间充质干细胞转化成软骨细胞的方式存在成本高，间充质干细胞转化率低等缺陷，提供一种能够实现单独诱导间充质干细胞转化成软骨细胞的细胞诱导培养基及采用该细胞诱导培养基诱导培养间充质干细胞的方法。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：提供一种细胞诱导培养基，包括TGF-β、地塞米松、抗坏血酸、甘油磷酸钠和ITS+Premix。

在本发明提供的细胞诱导培养基中，所述TGF-β的浓度为5-15ng/ml、地塞米松的浓度为7-10mmol/l、抗坏血酸的浓度为50-100ug/ml、甘油磷酸钠的浓度为5-15mmol/l和ITS+Premix的浓度为50-150ng/ml。

在本发明提供的细胞诱导培养基中，所述细胞诱导培养基中，TGF-β的浓度为10ng/ml，地塞米松的浓度为10mmol/l，抗坏血酸的浓度为70ug/ml，甘油磷酸钠的浓度为10mmol/l，ITS+Premix的浓度为100ng/ml。

在本发明提供的细胞诱导培养基中，所述细胞诱导培养基还包括胰岛素和转铁蛋白。

在本发明提供的细胞诱导培养基中，所述胰岛素的浓度为5-10mg/ml，转铁蛋白的浓度为5-10mg/ml。

在本发明提供的细胞诱导培养基中，所述细胞诱导培养基中，TGF-β的浓度为10ng/ml，地塞米松的浓度为10mmol/l，抗坏血酸的浓度为70ug/ml，甘油磷酸钠的浓度为10mmol/l，ITS+Premix的浓度为100ng/ml，胰岛素的浓度为6.25mg/ml，转铁蛋白的浓度为6.25mg/ml。

在本发明提供的细胞诱导培养基中，所述细胞诱导培养基还包括谷氨酰胺。

在本发明提供的细胞诱导培养基中，所述谷氨酰胺的浓度为1-10mmoL/L。

在本发明提供的细胞诱导培养基中，所述细胞诱导培养基中，TGF-β的浓度为15ng/ml，地塞米松的浓度为10mmol/l，抗坏血酸的浓度为100ug/ml，甘油磷酸钠的浓度为15mmol/l，ITS+Premix的浓度为150ng/ml，胰岛素的浓度为10mg/ml，转铁蛋白的浓度为10mg/ml，谷氨酰胺的浓度为10mmoL/L。

本发明进一步保护一种诱导培养间充质干细胞的方法，包括如下步骤：

获取间充质干细胞，并用诱导液进行体外诱导培养至转化为软骨细胞；

所述诱导液为上述细胞诱导培养基。

实施本发明提供的细胞诱导培养基，可以达到以下有益效果：该细胞诱导培养基不仅可实现单独诱导间充质干细胞转化为软骨细胞，而且通过本发明提供的细胞诱导培养基可提高间充质干细胞的诱导转化率，所获得的软骨细胞数量较多，活性较强；相较于现有的共培养方式，本发明提供的诱导培养软骨细胞的方法，不仅可省去获取软骨细胞源的过程，而且使用过程较简便。

附图说明

下面将结合附图及实施例对本发明作进一步说明，附图中：

图1为本发明提供的检测实验中，根据Chs标准样品工作液的浓度及其OD值所制作的标准曲线图。

具体实施方式

为解决现有技术中共培养方式所获得软骨细胞数量少、细胞较分散且需要软骨细胞源等缺陷，本发明的创新点在于提供一种细胞诱导培养基，该细胞诱导培养基可实现单独诱导间充质干细胞转化为软骨细胞的目的，且获得的软骨细胞数量较多，活性较强。

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。