[发明专利]人脂肪间充质干细胞的无血清培养基及其制备方法

说明书

本发明提供人脂肪间充质干细胞的无血清培养基，包括DMEM基础培养基，还包括如下组分：L‑谷氨酰胺、胰岛素样生长因子、表皮生长因子、转化生长因子、血小板源性生长因子、成纤维细胞生长因子、转铁蛋白、维生素C、人血清白蛋白和1,2,3,4,6‑O‑五没食子酰葡萄糖。本发明属于干细胞技术领域，本发明提供的人脂肪间充质干细胞的无血清培养基，能促进脂肪间充质干细胞的快速贴壁和快速增殖，保持良好的干细胞幼稚形态和干细胞特性。

技术领域

本发明属于干细胞技术领域，涉及一种人脂肪间充质干细胞的无血清培养基及其制备方法。

背景技术

人脂肪间充质干细胞（adipose-derived stem cells，ADSCs）是从脂肪组织中分离得到的一种具有多向分化潜能的干细胞。研究发现ADSCs细胞能够在体外稳定增殖，同时具有来源丰富，体内储备量大，取材比骨髓等容易，少量组织即可获取大量干细胞，衰亡率低等优点。成体脂肪组织来源的间充质干细胞在临床上具有很高的应用价值，广泛应用于组织工程及再生医学领域。

1,2,3,4,6-O-五没食子酰葡萄糖（1,2,3,4,6-Pentagalloylglucose，PGG）是从药用植物余甘子中提取得到的化合物，CAS登录号为14937-32-7。中国专利申请200910040157.6公开了1,2,3,4,6-O-五没食子酰葡萄糖的抗流感病毒方面的用途。

传统的含动物血清的干细胞培养基给干细胞的生产与科研带来多种不利因素。血清能为干细胞提供生长增殖所需的激素、生长因子、转移蛋白和其它营养物质，但其存在诸多缺点：批间差异较大，来源不稳定，需要大量验证工作，价格昂贵，成分不明确，不利于疫苗和单克隆抗体等目的产品的分离纯化，容易被病毒和支原体感染等。

无血清培养基是在基础培养基的基础上，加入成分明确的血清替代成分，既能满足干细胞的培养要求，又能有效避免因使用血清带来的诸多不利因素。因此，发展无血清培养基是干细胞走向临床应用的重要条件。目前已有一些市售干细胞无血清培养基，但是现有市售无血清培养基存在细胞增殖不够理想、价格昂贵等缺陷。

中国专利申请201210197360.6公开了一种无血清的脂肪间充质干细胞培养基，该培养基以高糖型DMEM为基础培养基，添加了牛磺酸、还原型谷胱甘肽和铜蓝蛋白等组分，但存在细胞贴壁性差，增殖缓慢的缺陷。

中国专利申请201310134502.9公开了一种无血清的脂肪间充质干细胞培养基，该培养基以低糖型DMEM为基础培养基，虽然添加了碱性成纤维生长因子、肝素和谷氨酰胺等组分，但脂肪间充质干细胞的生长增殖效果不够理想。

因此，现有技术存在细胞贴壁性差，细胞增殖速率不够理想等问题。

发明内容

为解决现有技术中存在的细胞贴壁性差，细胞增殖速率不够理想等问题，发明人通过大量试验筛选，得到一种新的人脂肪间充质干细胞的无血清培养基，该培养基的使用无需培养瓶进行包被，细胞贴壁性良好，细胞增殖速率高，保持良好的干细胞幼稚形态和干细胞特性，降低了成本。

本发明的目的将通过下面的详细描述来进一步体现和说明。

本发明提供一种人脂肪间充质干细胞的无血清培养基，包括DMEM基础培养基，还包括如下组分及其浓度：L-谷氨酰胺 1~10mM、胰岛素样生长因子5~100ng/mL、表皮生长因子1~50ng/mL、转化生长因子1~10 ng/mL、血小板源性生长因子1~10ng/mL、成纤维细胞生长因子1~50ng/mL、转铁蛋白 0.5~10μg/mL、维生素C 5~50μg/mL、人血清白蛋白0.2~3mg/mL和1,2,3,4,6-O-五没食子酰葡萄糖1.25~15μM。