[发明专利]一种抑制WIPI2基因表达的抑制剂及其在制备用于治疗乙肝的药物中的应用有效
| 申请号： | 201510505351.2 | 申请日： | 2015-08-17 |
| 公开（公告）号： | CN105087651B | 公开（公告）日： | 2018-08-24 |
| 发明（设计）人： | 辛永宁;宣世英;芦琳琳;耿宁 | 申请（专利权）人： | 青岛市市立医院 |
| 主分类号： | C12N15/867 | 分类号： | C12N15/867;A61K48/00;A61K31/713;A61P31/20;A61P1/16 |
| 代理公司： | 山东康桥律师事务所 37250 | 代理人： | 柳彦君 |
| 地址： | 266071 山*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 抑制 wipi2 基因 表达 抑制剂 及其 制备 用于 治疗 乙肝 药物 中的 应用 | ||
1.一种抑制 WIPI2 基因表达的抑制剂在制备用于治疗乙肝 的药物中的应用，抑制WIPI2 基因表达的抑制剂包括带有有效抑制 WIPI2 基因表 达的 shRNA 序列的载体，所述 shRNA 序列为 ：
F ：GATCCGGGAGACCGTGCACATCTTCAAAGGTACCTTTGAAGATGTGCACGGTCTCTTTTTG ；
R ：AATTCAAAAAGAGACCGTGCACATCTTCAAAGGTACCTTTGAAGATGTGCACGGTCTCCCG。
2.根据权利要求 1所述的抑制 WIPI2基因表达的抑制剂在制备用于治疗乙肝的药物中的应用，其特征在于：将所述 shRNA 与载体连接后形成慢病毒表达质粒，所述慢病毒表达质 粒经扩增后与包装辅助质粒共转染 293T 细胞，转染后培养并收集上清病毒液，通过超离心 浓缩病毒，得到高滴度的慢病毒浓缩液，将所述病毒浓缩液感染带有 HBV 的宿主细胞。
3.根据权利要求 2所述的抑制 WIPI2基因表达的抑制剂在制备用于治疗乙肝的药物中 的应用，其特征在于 ：所述扩增为 ：将所述慢病毒表达质粒转入 GeneHogs 化学感受态细菌， 经 PCR 扩增选取阳性克隆后提取的质粒即为扩增后的慢病毒表达质粒。
4.根据权利要求 2所述的抑制 WIPI2基因表达的抑制剂在制备用于治疗乙肝的药物中 的应用，其特征在于 ：转染后培养 48-72h 收集上清病毒粗液。
5.根据权利要求 2所述的抑制 WIPI2基因表达的抑制剂在制备用于治疗乙肝的药物中 的应用，其特征在于 ：所述宿主细胞为 HepG2.2.15 细胞。
6.根据权利要求 1所述的抑制 WIPI2基因表达的抑制剂在制备用于治疗乙肝的药物中的应用，其特征在于：所述 WIPI2 基因包含有序列为 GAGACCGTGCACATCTTCAAA 的目的基因片段。
7.根据权利要求 1所述的抑制 WIPI2基因表达的抑制剂在制备用于治疗乙肝的药物中的应用，其特征在于：所述载体为 pUCTP。
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