[发明专利]一种组织工程全层皮肤及其制备方法

权利要求书

1.一种组织工程全层皮肤，其特征在于，其包括表皮细胞、真皮细胞和生物支架材料；

其是将所述真皮细胞复合于所述生物支架材料内部，在表面接种所述表皮细胞，培养制备获得的。

2.根据权利要求1所述的组织工程全层皮肤，其特征在于，所述真皮细胞是按照如下制备方法制备获得的，其包括以下步骤：

步骤一：采集组织样品，所述组织样品用组织消化酶消化12h-20h之后，用机械法分开表皮和真皮部分；

步骤二：取所述真皮部分剪碎后，用胶原蛋白酶酶解、过滤，收集滤液，得真皮细胞；

步骤三：取所述真皮细胞，用任何供细胞自然生长的培养基培养；当细胞生长达到在培养器皿80％-90％覆盖率时，进行传代；所述传代按1:3-6比例传代。

3.根据权利要求1或2所述的组织工程全层皮肤，其特征在于，所述表皮细胞是按照如下制备方法制备获得的，其包括以下步骤：

步骤1：采集组织样品，所述组织样品用组织消化酶消化12h-20h之后，用机械法分开表皮和真皮部分；

步骤2：取所述表皮部分剪碎后，用胰蛋白酶酶解、过滤，收集滤液，得表皮细胞；

步骤3：取所表皮细胞，用加入了Rock蛋白激酶抑制剂的任何供细胞自然生长的培养基培养；当细胞生长达到在培养器皿80％-90％覆盖率时，进行传代；所述传代按1:1-6比例传代；

所述Rock蛋白激酶抑制剂的添加量为其终浓度达2-10μmol/L。

4.根据权利要求1所述的组织工程全层皮肤，其特征在于，所述的生物支架材料为机体可接受的生物可降解材料，包括胶原蛋白、细胞外基质复合物、透明质酸、多糖、硫酸软骨素、聚乳酸、聚羟基乙酸、聚乳酸和聚羟基乙酸的共聚物中的一种或两者以上混合物。

5.一种组织工程全层皮肤的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

基底层的配置：取MEM、L-谷氨酰胺、生物支架材料混合，调节pH值至pH7.0-pH7.4后，置于支撑膜上，固化，得基底层；

真皮层的配置：取MEM、L-谷氨酰胺、生物支架材料混合，调节pH值至pH7.0-pH7.4后，加入真皮细胞，置于所述基底层之上，固化之后，加入真皮培养基，培养2-4天，得真皮层；

组织工程全层皮肤的形成和成熟：取表皮细胞平铺于所述真皮层，孵育0.5h-2h，加入表皮培养基，培养2-4天；之后进行气液界面培养2-4天，即得。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述真皮细胞的制备方法包括以下步骤：

步骤一：采集组织样品，所述组织样品用组织消化酶消化12h-20h之后，用机械法分开表皮和真皮部分；

步骤二：取所述真皮部分剪碎后，用胶原蛋白酶酶解、过滤，收集滤液，得真皮细胞；

步骤三：取所述真皮细胞，用任何供细胞自然生长的培养基培养；当细胞生长达到在培养器皿80％-90％覆盖率时，进行传代；所述传代按1:3-6比例传代。

7.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述表皮细胞的制备方法包括以下步骤：

步骤1：采集组织样品，所述组织样品用组织消化酶消化12h-20h之后，用机械法分开表皮和真皮部分；

步骤2：取所述表皮部分剪碎后，用胰蛋白酶酶解、过滤，收集滤液，得表皮细胞；

步骤3：取所表皮细胞，用加入了Rock蛋白激酶抑制剂的任何供细胞自然生长的培养基培养；当细胞生长达到在培养器皿80％-90％覆盖率时，进行传代；所述传代按1:1-6比例传代；

所述Rock蛋白激酶抑制剂的添加量为其终浓度达2-10μmol/L。

8.根据权利要求5至7中任一项所述的制备方法，其特征在于，所述真皮层的配置中所述真皮培养基包括以下含量的各个组分：

9.根据权利要求5至7中任一项所述的制备方法，其特征在于，所述组织工程全层皮肤的形成和成熟中所述表皮培养基包括以下含量的各个组分：

10.如权利要求5至9中任一项所述的制备方法制备获得的组织工程全层皮肤。