[发明专利]尿液中巯基类化合物检测试剂盒及制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及医学检验领域的尿液检测试剂，具体涉及一种尿液中巯基类化合物检测试剂盒及制备方法和应用。

背景技术

在全世界危害女性健康的恶性肿瘤中，宫颈癌是全球女性中仅次于乳腺癌的最常见的妇科恶性肿瘤之一。在一些发展中国家其发病率居首位，据国际癌症研究中心估计，每年大约有371200的宫颈癌新发病例，占所有肿瘤的9.8％，占女性新发病例的15％，其中78％的病例发生在发展中国家,发达国家仅占4.4％。我国地域广阔、人口众多，根据90年代卫生部全国肿瘤防治研究办公室组织的大规模全国人口死亡原因调查显示,每年有新发病例约10万，占世界宫颈癌新发病例总数的四分之一。经过几十年广泛开展妇科普查，宫颈癌的发病率及死亡率降低了近68％，但从全国范围来看，宫颈癌的患病率仍居妇科恶性肿瘤的第一位。

宫颈癌前病变和宫颈癌发病过程中(早中晚期)整个巯基分子将不可逆的脱落并从尿液中排出体外，而机体正常情况下并无巯基分子脱落，因此检测尿液中的巯基化合物可用于宫颈癌的筛查和辅助诊断。临床数据及多篇文献表明：尿液巯基化合物浓度显著增高常见于子宫颈组织癌变过程。

现有技术中存在利用巯基可将磷钨酸还原成钨蓝而呈蓝色的特性制备出用于提示宫颈癌病变的尿液中巯基类代谢物检测试剂盒，比如CN104181155A中就公开了一种相关试剂盒及其制备方法，但由于尿液中除了巯基类代谢物具有还原性外，尿液中的尿酸和Vc同样具有还原性，同样可以与磷钨酸反应而显色，该文献中采用对照试剂中添加汞离子排除巯基代谢物的方法，通过对照组和检测组的颜色深浅的比对来排除尿酸和Vc的干扰，虽然这种方法可以排除假阳性的问题，但是肉眼分辨深浅，很容易造成误判，特别是在巯基类代谢物含量较低时对照组和检测组的显色非常接近，分辨误差大，容易造成假阴性误判，从而大大降低了该检测试剂的准确性和精确性，限制该产品的实际应用，且尿液中含有蛋白会对试剂的准确性产生干扰

发明内容

本发明提供了一种尿液中巯基类化合物检测试剂盒及制备方法和应用，用以解决目前巯基检测试剂假阴性误判突出，检测准确性和精确度低的问题。

为了解决上述技术问题，本发明的技术方案是：所述尿液中巯基类化合物检测试剂盒，包括检测试剂、对照试剂和显色试剂；

其中，所述检测试剂为包含亚汞离子化合物和三氯乙酸的水溶液；

所述对照试剂为包含汞离子化合物、亚汞离子化合物和三氯乙酸的水溶液；

所述显色试剂为包含磷钨酸、硅钨酸和锂离子化合物的缓冲溶液。

其中对照试剂与检测试剂中三氯醋酸可破坏尿液中蛋白质分子的结构，使得干扰蛋白质沉淀，避免假阳性产生，在三氯醋酸和磷钨酸的分步作用下，近100％的蛋白质可以被除去，提高测定结果的准确性，试剂中亚汞离子可与尿液中的无机盐结合，防止其干扰整个反应过程，加强试剂测定的稳定性。对照试剂中汞离子可选择性与尿液中巯基代谢物反应，与检测试剂比对后排出假阳性问题。显色试剂中的硅钨酸可优先与尿液中的还原性物质如尿酸、Vc等反应，避免其与磷钨酸发生还原反应，从而有效避免了因尿酸、Vc显色干扰对照组和检测组的显色比对，导致假阴性误判。

进一步的，所述亚汞离子化合物选自硝酸亚汞或氯化亚汞，所述汞离子化合物选自硫酸汞、硝酸汞或氯化汞，所述锂离子化合物选自硫酸锂或碳酸锂。

进一步的，所述亚汞离子化合物为氯化亚汞，所述汞离子化合物为氯化汞，所述锂离子化合物为碳酸锂。

进一步的，所述检测试剂中，亚汞离子的浓度为0.001mol/L，三氯醋酸的质量浓度为10wt％；所述对照试剂中，亚汞离子的浓度为0.001mol/L，汞离子的浓度为0.04-0.045mol/L，三氯醋酸质量浓度为10wt％；所述显色试剂中，磷钨酸的浓度为36-57g/L，硅钨酸的浓度为8.5-20g/L，锂离子的浓度为1-2.7mmol/L。所述离子浓度是指以亚汞离子、汞离子或锂离子的浓度，相应亚汞离子化合物、汞离子化合物或锂离子化合物的浓度要根据上述离子浓度进行换算，比如亚汞离子的浓度为0.001mol/L，则氯化亚汞的浓度为0.001mol/L，汞离子浓度为0.04-0.045mol/L，则氯化汞的浓度为0.04-0.045mol/L，锂离子的浓度为1-2.7mmol/L，则碳酸锂的浓度为0.5-1.35mmol/L。所述汞离子的浓度如果低于0.04mol/L时，则在巯基代谢物浓度较高时，存在不能完全反应的情况，则之后还是会与磷钨酸反应显色，则会做出阴性的误判。