[发明专利]一种赤芍中芍药苷和芍药内酯苷的HPLC-ELSD含量测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种赤芍中芍药苷和芍药内酯苷的HPLC-ELSD含量测定方法，属于生物医药领域。

背景技术

赤芍为毛莨科植物芍药(PaeonialactifloraPall.)或川赤芍(PaeoniaveitchiiLynch)的干燥根，有着悠久的用药历史。近几年研究发现，赤芍具有抗凝血、抗血栓、抗动脉粥样硬化、保护心脏和肝脏、保护脑缺血所致脑损伤等广泛的药理作用，有着广阔的应用前景。

赤芍主要有效成分为芍药苷、芍药内酯苷、羟基芍药苷、苯甲酰芍药苷等单萜苷类化合物，总称赤芍总苷，其中芍药苷和芍药内酯苷约占总苷的70％。芍药苷具有扩张血管、镇痛镇静、抗炎抗溃疡、解热解痉、利尿的作用，芍药内酯苷具有镇痛镇静、抗惊厥作用、对免疫系统、对平滑肌作用、抗炎、抗病原微生物、护肝的功效。中药的临床使用多采用配伍，作用形式是多靶点的而且是中药中的多种成分共同发挥药效。大多数研究者采用高效液相色谱法(DAD检测器)对赤芍的质量进行评价，DAD检测器要求物质有紫外发射基团，赤芍中的芍药苷和芍药内酯苷这类苷类成分的紫外发射团处于近紫外区，摩尔吸光系数较小，采用DAD对这两种物质的定量有一定的限制。

发明内容

针对现有技术不足，本发明目的是提供一种赤芍中芍药苷和芍药内酯苷的HPLC-ELSD含量测定方法，该方法利用HPLC-ELSD法同时对赤芍中芍药苷和芍药内酯苷的含量进行测定，对中药赤芍的整体质量进行更好的控制，并对赤芍临床用药奠定基础。

本发明采用的技术方案为：

一种赤芍中芍药苷和芍药内酯苷的HPLC-ELSD含量测定方法，包括如下步骤：

1)供试品溶液的制备，将干燥赤芍的根粉碎，过筛，称取1g赤芍粉末，用10mL70％甲醇水溶液浸泡1h，加热回流提取1h，冷却称重，补足失重，取溶液过滤，取续滤液作为供试品溶液；

2)对照品溶液的制备，精密称取芍药苷和芍药内酯苷，用70％甲醇水溶解至容量瓶，定容，摇匀，分别得10mg/mL的芍药苷对照品溶液和3mg/mL的芍药内酯苷对照品溶液；

3)检测，分别取2)中芍药苷对照品溶液、芍药内酯苷对照品溶液进行检测，检测条件为C₁₈柱，以乙腈-0.05％甲酸水溶液为流动相进行等度洗脱，采用ELSD检测器进行HPLC-ELSD检测，分别计算同一保留时间下的峰面积，以芍药苷含量x为横坐标，峰面积y为纵坐标绘制标准曲线，得到芍药苷的标准曲线方程；以芍药内酯苷含量x为横坐标，峰面积y为纵坐标绘制标准曲线，得到芍药内酯苷的标准曲线方程；取1)中供试品溶液在高效液相色谱检测条件为C₁₈柱，以乙腈-0.05％甲酸水溶液为流动相进行等度洗脱，采用ELSD检测器进行HPLC-ELSD检测，将所得芍药苷和芍药内酯苷的峰面积带入标准曲线线性回归方程中，即可得出赤芍中芍药苷和芍药内酯苷的含量。

所述的一种赤芍中芍药苷和芍药内酯苷的HPLC-ELSD含量测定方法，所述步骤3)中乙腈和0.05％甲酸水溶液均用0.45μm微孔滤膜过滤，在超声仪中超声30min。

所述的一种赤芍中芍药苷和芍药内酯苷的HPLC-ELSD含量测定方法，所述步骤3)中乙腈和0.05％甲酸水的体积比为(10-20):(90-80)。

所述的一种赤芍中芍药苷和芍药内酯苷的HPLC-ELSD含量测定方法，所述步骤3)中乙腈和0.05％甲酸水的体积比为14:86。

所述的一种赤芍中芍药苷和芍药内酯苷的HPLC-ELSD含量测定方法，所述步骤3)中C₁₈柱的规格为250mm×4.6mm×5μm，柱温30℃。

所述的一种赤芍中芍药苷和芍药内酯苷的HPLC-ELSD含量测定方法，所述步骤3)中C₁₈柱，乙腈和0.05％甲酸水的流速为1mL/min，进样量5μL。

所述的一种赤芍中芍药苷和芍药内酯苷的HPLC-ELSD含量测定方法，所述步骤3)中ELSD漂移管温度为110℃，载气为氮气，载气压力为0.45MPa，气流量是3L/min。

本发明具有以下有益效果：

本发明的方法可用于芍药苷和芍药内酯苷的含量测定，专属性、耐用性、精密度、准确度良好，适用于中药赤芍的整体质量控制。