[发明专利]一种高抗庆大霉素干酪乳杆菌及其选育方法

说明书

【技术领域】

本发明属于生物技术领域。更具体地，本发明涉及一种高抗庆大霉素干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)GM-1，还涉及一种高抗庆大霉素干酪乳杆菌GM-1的选育方法。

【背景技术】

乳杆菌是与人类生活关系密切的益生菌之一，广泛应用于食品发酵、工业乳酸发酵及医疗保健领域。其中，干酪乳杆菌具有较强的耐酸、耐胆盐能力，在消化道中有较强生命力，并对其有较强的粘附能力，同时大量动物和人体实验表明，干酪乳杆菌具有较强的抑制致病菌、降血脂、提高有机体抗氧化、保护肝脏、预防糖耐受量受损和II型糖尿病、调节有机体免疫力及抗肿瘤等益生功能。

庆大霉素属于氨基糖苷类抗生素，常常作为一线药物用于治疗胃肠道中细菌引起的炎症、尿路生殖系统感染、胆道感染、中枢神经系统感染和呼吸道感染的治疗。

一般地，服用抗生素期间不建议食用益生菌制品。抗生素的出现可能会导致益生菌的活力减弱甚至死亡，影响其发挥特有的生理功效，这对日常生活过程中习惯食用益生菌制品的人群极为不利。但事实上，近年来越来越多的临床研究证据表明，同时服用益生菌和抗生素更有利于一些疾病的治疗。因此，围绕抗生素选育具有耐药特性的益生菌具有非常重要的现实意义。

本发明利用微生物在特定生长条件下的适应性进化实施干酪乳杆菌抗庆大霉素选育试验，是一种基于自然选择的选育方法，具有安全显效的特点。通过耐药实验证实所得干酪乳杆菌GM-1对庆大霉素具有高耐药性特征，该特征可确保干酪乳杆菌GM-1制品在与庆大霉素同时服用时维持较高的活力。同时，这一方法的建立可为高抗庆大霉素乳酸菌制品的研究和开发利用奠定坚实的基础。

【发明内容】

[要解决的技术问题]

本发明的目的是提供一种高抗庆大霉素干酪乳杆菌GM-1。

本发明的另一个目的是提供一种高抗庆大霉素干酪乳杆菌GM-1的选育方法。

[技术方案]

本发明是通过下述技术方案实现的。

本发明涉及一种高抗庆大霉素干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)GM-1，该菌株已于2015年07月17日在北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，其保藏号为CGMCC No.11131。

根据本发明的一种优选实施方式，所述的高抗庆大霉素干酪乳杆菌GM-1的MIC值为16μg/mL。

本发明还涉及一种高抗庆大霉素干酪乳杆菌GM-1的选育方法，该选育方法包括下述步骤：

A、菌株活化培养

干酪乳杆菌Zhang CGMCC No.1697在液体MRS培养基中在温度37℃与有氧的条件下活化培养24h，这样传代培养3代，然后将得到的培养液在固体MRS平板上划线，在温度37℃的条件下培养48h，再随机选取三个单菌落作为出发菌株，它们在MRS培养基中在温度37℃与有氧条件下活化传代培养3代，然后冻干保藏，它们分别命名为干酪乳杆菌Zhang-1、干酪乳杆菌Zhang-2和干酪乳杆菌Zhang-3。

B、制备接种液

挑取步骤A中干酪乳杆菌Zhang-1、干酪乳杆菌Zhang-2和干酪乳杆菌Zhang-3单菌落分别于5mL生理盐水中混匀得到三种菌悬液，用LSM培养液稀释菌悬液至在波长600nm条件下OD值为0.16-0.2，得到干酪乳杆菌Zhang-1、Zhang-2和Zhang-3接种液。

C、含庆大霉素培养液培养

按照LSM培养基体积的1％接种量，把干酪乳杆菌Zhang-1、干酪乳杆菌Zhang-2和干酪乳杆菌Zhang-3接种液分别加到一组终浓度为0.125、0.25、0.5、1、4、8、16、32与64μg/mL庆大霉素的LSM培养基中，接着在温度37℃的条件下发酵培养24h，得到一组试验发酵液。

D、无庆大霉素培养液培养

采用与步骤C操作方式相同的方式，让干酪乳杆菌Zhang-1、干酪乳杆菌Zhang-2和干酪乳杆菌Zhang-3在不添加庆大霉素的LSM培养基中进行空白对照发酵，得到一组空白对照发酵液。

E、紫外分光光度法测定

在步骤C与步骤D结束后，采用紫外可见光分光光度法在波长600nm处测定所述试验发酵液OD值与所述空白对照发酵液OD值，然后对比分析确定能够抑制50％干酪乳杆菌Zhang生长的庆大霉素浓度，即庆大霉素IC₅₀测定值。