[发明专利]一种铁皮石斛中甘露糖含量的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及分析化学技术领域，特别涉及一种铁皮石斛中甘露糖含量的检测方法。

背景技术

铁皮石斛(DendrObiumOfficinaleKimuraetMigo)，俗称铁皮枫斗，是被中国药典收载的5种石斛属植物之一，为常用名贵中药，具有养胃生津、滋阴降火、提高机体免疫功能的功效，用于热病津伤，口干烦渴，胃阴不足，食少干呕，病后虚热不退，阴虚火旺，骨蒸劳热，目暗不明，筋骨萎软。其主要功效成分为铁皮石斛多糖。华允芬、吕洪飞等人比较了石斛属的多种植物，发现多糖是铁皮石斛的特征性成分。文献报道，铁皮石斛多糖主要含有多糖I、II、III，相对分子质量分别为1000000、500000和120000，多糖水解物主要含甘露糖(Man)、葡萄糖，还含有微量的阿拉伯糖和木糖。甘露糖是目前唯一用于临床上的糖质营养素，广泛分布于体液和组织中，尤其是在神经、皮肤、睾丸、视网膜、肝和肠。

龚庆芳等在不同产地铁皮石斛的品质比较研究中提到，不同产地的铁皮石斛多糖和甘露糖的含量差异显著，一般在18.00％～32.35％，其中采自云南、浙江的种质在多糖和甘露糖方面有着优良的遗传基础。因此，检测甘露糖的含量可直接反映铁皮石斛品质的优劣。

然而，甘露糖等单糖成分多为己糖结构，在紫外区无吸收，直接采用紫外法或HPLC法无法测定。甘露糖需要经衍生处理才有紫外吸收，衍生后采用紫外法或HPLC法测定，但衍生条件不容易控制，且衍生试剂有毒，易污染环境和检测人员身体造成伤害。中国药典一部(2010版)铁皮石斛项下，甘露糖照高效液相色谱法(附录VID)测定：

色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.02mol/L的乙酸铵溶液(20：80)为流动相；检测波长为250nm。理论板数按甘露糖峰计算应不低于4000。

校正因子测定：取盐酸氨基葡萄糖适量，精密称定，加水制成每1mL含12mg的溶液，作为内标溶液。另取甘露糖对照品约10mg，精密称定，置100mL量瓶中，精密加入内标溶液1mL，加水适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，吸取400μL，加0.5mo1/L的PMP(1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮)甲醇溶液与0.3mol/L的氢氧化钠溶液各400μL，混匀，70℃水浴反应100分钟。再加0.3mol/L的盐酸溶液500μL，混匀，用三氯甲烷洗涤3次，每次2mL，弃去三氯甲烷液，水层离心后，取上清液10μL，注入液相色谱仪，测定，计算校正因子。

测定法：取本品粉末(过三号筛)约0.12g，精密称定，置索氏提取器中，加80％乙醇适量，加热回流提取4小时，弃去乙醇液，药渣挥干乙醇，滤纸筒拆开置于烧杯中，加水100mL，再精密加入内标溶液2mL，煎煮1小时并时时搅拌，放冷，加水补至约100mL，混匀，离心，吸取上清液1mL，置安瓿瓶或顶空瓶中，加3.0mol/L的盐酸溶液0.5mL，封口，混匀，110℃水解1小时，放冷，用3.0mol/L的氢氧化钠溶液调节pH值至中性，吸取400μL，照校正因子测定方法，自“加0.5mol/L的PMP甲醇溶液”起，依法操作，取上清液10μL，注入液相色谱仪，测定，即得。本品按干燥品计算，含甘露糖(C₆H₁₂O₆)应为13.0％～38.0％。

然而，研究发现中国药典公开的方法并不能准确测定甘露糖的含量，而且水提衍生法冗长，效率较低。因此，急需一种能够高效、准确测定铁皮石斛中甘露糖含量的方法。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种铁皮石斛中甘露糖含量的检测方法。该检测方法可准确检测铁皮石斛中甘露糖的含量，RSD为0.5％，具有较好的精密度，同时，检测效率高，安全性高。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种铁皮石斛中甘露糖含量的检测方法，将铁皮石斛微波提取，水解，获得甘露糖供试品，采用HPLC进行检测，HPLC的色谱条件为：

采用钙型糖柱，以纯化水或乙腈水溶液进行等度洗脱，根据HPLC检测结果，获得甘露糖含量。

本发明的检测原理：铁皮石斛试样中的含甘露糖的多糖成分用微波提取,并在一定浓度的硫酸水解条件下水解出甘露糖，以甘露糖作为标准计，检测其含量。

本发明提供的甘露糖含量的检测方法可准确检测铁皮石斛中甘露糖的含量，RSD为0.5％，具有较好的精密度。