[发明专利]一种天然林下外生菌根合成的专用菌源的使用方法

说明书

技术领域

本发明属于真菌学领域，具体涉及一种天然林下外生菌根合成的专用菌源的使用方法。

背景技术

据国内报道，外生菌根食用菌占已知食用菌种数的677个/966个，且多数因含人类必须活性物质而归属于人类健康食品，加上外生菌根菌对森林生态的巨大贡献，必将成为未来食用菌产业的发展方向。包括正红菇、松茸、美味牛肝菌、松乳菇、鸡枞、红牛肝、黄牛肝、干巴菌，但不限止这些种类，相当多种类被公认是世界著名的健康+美味食品。

使林业树木感染菌根菌并形成共生体的技术称为菌根化技术。菌根化技术无疑是发展菌根食用菌的必由之路。目前实现产业化的块菌菌根化技术就是一个经济效益突显的应用例子。

到目前为止，能够稳定地进行规模化、商业化仿生栽培的菌根化模式仅块菌(Ttuber sp)模式，该模式通过苗期接种、菌根合成、园林化移植、规范化管理来获得可食用子实体，这些获得成功的菌根食用菌的共同特征是可以在森林郁闭度较低环境下获得子实体。而对于更大比例的中后期菌根菌，该模式无效。由于中后期外生菌根菌需要在郁闭度较高的成熟林分下才能采集到，不能采用块菌菌根化的办法，天然林下菌根化技术是中后期菌根食用菌开发的前提，技术应用前景广阔。

世界各地，包括我国主要进行林业苗木菌根化，成林菌根化研究进展缓慢。究其原因包括：其一，林木幼苗期的细根幼嫩，易于菌根侵入（孟繁荣 邵景文 曲绍义，1995）；其二，苗圃的土壤易于人工控制环境，直至使用消毒土壤以减少菌根接种过程的杂菌干扰；其三，苗木接种较易控制光温水湿等外部条件。相比较而言，天然林下接种非但无上述有利条件，还得忍受林下土壤中丰富的微生物种类，包括先期定殖的菌根菌，对菌根菌接种的种种不利影响。林下接种难是外生菌根菌和菌根食用菌发展的瓶颈。试图绕过这个瓶颈，采用美味牛肝菌共生苗木移入成林的办法也无法成功（Hall I. R. Lyon A. J. E. Wang Y.，1998）。

菌根化技术中通常使用的接种源有人工培养菌丝体和真菌孢子，人工培养菌丝体在微生物种类丰富的森林土壤中存活时间很短，难以接种成功；真菌孢子可以在森林土壤中获得较长的存活期和较高接种率，但由于收集难、成本高，且无法进行人工繁殖，从而影响规模化、商业化发展，目前主要用于天然林下菌根化试验。

发明内容

本发明的目的在于提供一种天然林下外生菌根合成的专用菌源的使用方法，不仅可以通过人工繁殖获得大量在天然林下存活时间较长、接种成功率高的菌源，同时还弥补少数难于分离纯化的菌根菌的繁殖问题。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种天然林下外生菌根合成的专用菌源的使用方法：培养与目标菌根菌有共生关系的健康林业苗木，实施苗期菌根化技术以获得目标菌的成熟菌根；将精挑细选的健康菌根截成2±0.5mm长的片断，按150±50个片断/L的比例混入预先混匀经高温灭菌且温度为10℃-25℃的蛭石、泥碳土、无菌水的混合物中，直接用作菌源实施苗木或成林菌根化，或用作下一代菌根的接种源。

所述的蛭石、泥碳土、无菌水的混合物中蛭石、泥碳土、无菌水的重量比为1：1：0.44。

精挑细选的健康菌根是指，剪切直径2mm以下的细根，用无菌水仔细清洗浮泥；置显微镜下检测，去除所有病变变色和/或菌套生长较弱的菌根，置10℃环境下无菌保存；使用前，先将菌根剪切成2±0.5mm长的片断，再次抽样镜检，确保菌根片断无病率达显著水平。

天然林下接种或苗圃接种方法：将接种物包被于寄主细根周边，每穴放150±30ml容积的接种物，以确保接种后每个寄主细根的周边平均8个，至少有1个菌源菌索与目标细根近距离接触，接种时及其后的2周时间，按菌根菌对环境的要求进行光、温、湿、气调节。

本发明的显著优点在于：本发明不仅可以通过人工繁殖获得大量在天然林下存活时间较长、接种成功率高的菌源，同时还弥补少数难于分离纯化的菌根菌的繁殖问题。本发明提供的接种源在10℃温度+70%湿度的阴暗环境下，存活时间可达4周以上（供试的红菇属及牛肝菌属真菌在15-20℃条件下，离体4周后的培养成功率30%）；在25℃环境下，存活时间1周以上，比以菌丝或孢子为菌源的接种明显提高接种的成功率。