[发明专利]锰超氧化物歧化酶SOD2的体外分子检测方法及引物

说明书

技术领域

本发明属于分子生物学领域，主要应用于生物体外实验，和临床体外诊断，尤其是一种锰超氧化物歧化酶SOD2的体外分子检测方法及引物。

技术背景

SOD是SuperOxideDismutase缩写，中文名称超氧化物歧化酶，是生物体内重要的抗氧化酶，广泛分布于各种生物体内，如动物，植物，微生物等。SOD具有特殊的生理活性，是生物体内清除自由基的首要物质。SOD在生物体内的水平高低意味着衰老与死亡的直观指标；现已证实，由氧自由基引发的疾病多达60多种。它可对抗与阻断因氧自由基对细胞造成的损害，并及时修复受损细胞，复原因自由基造成的对细胞伤害。由于现代生活压力，环境污染，各种辐射和超量运动都会造成氧自由基大量形成。

SOD常用于对缺血、出血性心、脑等重要脏器病伤(或手术治疗后)引发的继发性(自由基)过氧化损伤及其自由基清除药物治疗效果的监测，以指导临床制定相应的自由基清除干预对策及最佳治疗时间窗的确立，它对自由基继发损伤病情的诊断、自由基清除治疗疗效跟踪和预后判断与评估等具有重要参考价值。比较一致的意见是：SOD测定虽然是一种非特异的辅助诊断指标，但对机体自由基代谢紊乱、自由基清除干预对策、以及对于同一病患者病程转归(自由基损伤的加剧或降低、自由基清除剂药物或手术治疗效果)的判断，实时动态监测具有重要参考价值。

SOD2是SOD家族的一种，目前目前体外的SOD的检测方法主要集中在蛋白质与蛋白质互作的elisa法和酶竞争法，此方法可以检测酶的活性，但是由于样品蛋白质认为操作因素导致误差大，且蛋白质不稳定，极易降解和变性，导致活性下降和失活。结果的可信度大打折扣。且检测是检测所有的SOD，无法具体区分SOD2中的具体含量。

目前市场还尚未发现有关分子检测SOD2的试剂盒，此发明对未来SOD2更加精确应用到临床等领域提供了强有力的分子检测基础。

CN102095856A公开了一种超氧化物歧化酶快速检测卡及其检测方法，在长条扁平薄壳状的检测卡外壳中设置测试条，检测卡外壳表面有检测窗孔和加样孔；测试条是由支承背板上通过不干胶在其上依次粘贴样品垫、胶体金膜、硝酸纤维素膜、和吸水膜所组成；支承背板中部叠置粘贴硝酸纤维素膜，支承背板一端叠置粘贴吸水膜，另一端叠置粘贴样品垫，吸水膜内端与样品垫内端各自分别与硝酸纤维素膜搭接，在样品垫与硝酸纤维素膜的搭接部，两者之间夹置粘贴一段胶体金膜；胶体金膜为含抗超氧化物歧化酶抗体胶体金标记的玻璃纤维膜，硝酸纤维素膜上有一条检测带和一条质控带，依次是：含超氧化物歧化酶的检测带，含抗兔抗体或抗鼠抗体的质控带，测试条置入检测卡外壳内，样品垫正对加样孔，硝酸纤维素膜正对检测窗孔。

目前市场还尚未发现有关SOD2的分子水平检测试剂盒，本发明对未来分子检测SOD提供了强有力的基础。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足之处，提供一种人体内锌铜超氧化物歧化酶SOD2表达量的体外分子检测方法及所用的引物，本方法可以在体外检测人体不同组织、细胞受到的氧化损伤程度的相对大小，可应用于体外基因分子诊断等方面。

本法实现目的的技术方案如下：

一种锰超氧化物歧化酶SOD2的体外分子检测引物，正向引物序列见序列1，反向引物序列见序列2。

与锰超氧化物歧化酶SOD2的体外分子检测引物配合使用的内参引物，正向引物序列见序列3，反向引物序列见序列4。

一种锰超氧化物歧化酶SOD2的体外分子检测方法，步骤如下

⑴目标组织或细胞中总RNA的提取：

⑵采用步骤⑴提取出的RNA进行逆转录PCR，获得模板RNA；

⑶采用锰超氧化物歧化酶SOD2的体外分子检测引物，正向引物序列见序列1，反向引物序列见序列2，以及步骤⑵的模板RNA进行实时荧光定量PCR。

本发明的优点和积极效果：

本发明开发一种以荧光定量PCR检测为主的相对定量检测试剂盒，也可以稳定、特异、准确的检测出人的不同组织、细胞中SOD2基因的表达量差异，且有极高的重复性。克服了市场上常用酶活检测试剂盒的人为因素影响大、稳定性差、重复性差等因素。在医疗检测和化妆品抗衰老领域，配合大量临床实验数据的基础上，可以早期判断由于SOD2酶表达量高低反映相关疾病的情况，对疾病的早期治疗和预防起到积极的作用。目前市场上还未出现关于SOD2的检测产品，尤其是分子生物学检测的方法，有利于推动SOD分子检测市场的发展。

附图说明