[发明专利]锌铜超氧化物歧化酶SOD1表达量的分子检测方法及引物

说明书

本发明涉及一种锌铜超氧化物歧化酶SOD1表达量的分子检测方法及所用的引物，正向引物序列见序列1，反向引物序列见序列2。本发明提供一种锌铜超氧化物歧化酶SOD1表达量的分子检测方法，首次用qPCR的方法，以基因水平的检测来鉴定SOD1的含量，同时提供一套有针对性引物序列和内参序列，即使在样品提取的RNA中有DNA污染的情况下，也可以稳定、特异、准确的检测出人的不同组织、细胞中SOD1基因的表达量差异，且有极高的重复性，克服了市场上常用酶活检测试剂盒的人为因素影响大、稳定性差、重复性差等因素。

技术领域

本发明属于生物检测领域，涉及一种体外基因分子诊断方法，尤其是一种锌铜超氧化物歧化酶SOD1表达量的分子检测方法及所用的引物。

技术背景

超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase简称SOD)是一种新型酶制剂。它在生物界的分布极广，几乎从动物到植物，甚至从人到单细胞生物，都有它的存在。SOD被视为生命科技中最具神奇魔力的酶，是人体内的垃圾清道夫，SOD是氧自由基的自然天敌，是机体内氧自由基的头号杀手，是生命健康之本。

由于现代生活压力、环境污染、各种辐射以及超量运动等都会造成氧自由基大量形成，现已证实，氧自由基可引发的疾病多达60多种。SOD在生物体内的水平高低意味着衰老与死亡的直观指标，它可对抗与阻断因氧自由基对细胞造成的损害，并及时修复受损细胞，修复基因自由基造成的对细胞伤害。因此，生物抗氧化机制中SOD的地位越来越重要。

SOD1是SOD家族中的一种，基本上所有的真核细胞的细胞内都含有带有铜和锌的超氧化物歧化酶，是一种可溶性蛋白，主要存在于细胞质中。目前体外的SOD的检测方法主要集中在蛋白质与蛋白质互作的elisa法和酶竞争法，此方法可以检测酶的活性，但是由于样品蛋白质人为操作因素导致误差大，且蛋白质不稳定，极易降解和变性，导致活性下降和失活,结果的可信度大打折扣。

CN102095856A公开了一种超氧化物歧化酶快速检测卡及其检测方法，在长条扁平薄壳状的检测卡外壳中设置测试条，检测卡外壳表面有检测窗孔和加样孔；测试条是由支承背板上通过不干胶在其上依次粘贴样品垫、胶体金膜、硝酸纤维素膜、和吸水膜所组成；支承背板中部叠置粘贴硝酸纤维素膜，支承背板一端叠置粘贴吸水膜，另一端叠置粘贴样品垫，吸水膜内端与样品垫内端各自分别与硝酸纤维素膜搭接，在样品垫与硝酸纤维素膜的搭接部，两者之间夹置粘贴一段胶体金膜；胶体金膜为含抗超氧化物歧化酶抗体胶体金标记的玻璃纤维膜，硝酸纤维素膜上有一条检测带和一条质控带，依次是：含超氧化物歧化酶的检测带，含抗兔抗体或抗鼠抗体的质控带，测试条置入检测卡外壳内，样品垫正对加样孔，硝酸纤维素膜正对检测窗孔。

目前市场还尚未发现有关SOD1的分子水平检测试剂盒，本发明对未来分子检测SOD提供了强有力的基础。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足之处，提供一种人体内锌铜超氧化物歧化酶SOD1表达量的体外分子检测方法及所用的引物，本方法可以在体外检测人体不同组织、细胞受到的氧化损伤程度的相对大小，可应用于体外基因分子诊断等方面。

本法实现目的的技术方案如下：

一种锌铜超氧化物歧化酶SOD1表达量的分子检测用引物，

正向引物序列：CAGAAGGAAAGTAATGGACCAGTGA；

反向引物序列：AGTCTCCAACATGCCTCTCTTCATC。

与锌铜超氧化物歧化酶SOD1表达量的分子检测用引物配合使用的内参基因GAPDH引物，内参基因的正向引物序列：GGAGCGAGATCCCTCCAAAAT

内参基因的反向引物序列：GGCTGTTGTCATACTTCTCATGG。

一种锌铜超氧化物歧化酶SOD1表达量的分子检测方法，方法如下：