[发明专利]一种利用啤酒废液生产酵母发酵态锰饲料添加剂的方法

说明书

一种利用啤酒废液生产酵母发酵态锰饲料添加剂的方法，其步骤包括培养基制备以及微生物培养、制备基础液体培养基与锰梯度培养基、微生物梯度培养、制备种子培养基、制备发酵种子、制备发酵液、微生物发酵、制作酵母发酵态锰饲料添加剂与包装。本发明提供了一种利用啤酒生产过程中糖化废水和发酵废水生产酵母发酵态锰饲料添加剂的处理方法，方法简单，容易操作，效果理想，既提高了资源利用效率，降低了生产成本，又可以对啤酒生产中的废水进行生物处理，减少了环境污染，所制备的酵母发酵态锰饲料添加剂生物有效性高，对动物的添加量低，并能提高动物的生产性能。

技术领域

本发明属于饲料添加剂及生物技术领域，尤其是一种利用啤酒废液生产酵母发酵态锰饲料添加剂的方法。

背景技术

锰是动物体必需的微量矿物元素之一，其在动物体内的含量约0.2~0.3mg/kg。锰主要营养作用是在碳水化合物、脂类、蛋白质和胆固醇代谢中作为酶活化因子或组成部分。缺锰可导致动物采食量下降、生长减慢、饲料利用率降低、骨异常、共济失调和繁殖功能异常等。日粮添加一定量锰是满足动物体锰需要的重要措施。目前，锰主要以无机锰盐的形式添加，其吸收率一般为5%~10%，大量的锰随粪便排出污染环境。

我国是啤酒生产消费大国，在其生产过程中会产生20-30倍的废水，其中糖化废水和发酵废水中有机养分含量丰富。研究表明，糖化和发酵后排放的废水COD浓度在2000~4000mg/L，并且以可溶态的糖类、氨基酸、醇类、维生素等为主。因此，通过对其营养成分调控后，能够作为微生物的营养基质来生产一系列微生物发酵类产品。

发明内容

本发明的目的是提供一种利用啤酒废液生产酵母发酵态锰饲料添加剂的方法，将啤酒生产过程中的废液（糖化废液和发酵废液）经过适当理化性质调控后作为发酵液，以酵母菌作为发酵菌种，对无机锰盐进行发酵处理，研制酵母发酵态的锰饲料添加剂，从而提高锰的吸收利用率，降低粪便锰排出对环境的污染。

为了解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是：一种利用啤酒废液生产酵母发酵态锰饲料添加剂的方法，所用的发酵菌种为啤酒酵母和产朊假丝酵母，所用的锰为可溶解在稀酸溶液中的无机锰化合物，具体制备步骤如下：

（1）培养基制备以及微生物培养

取葡萄糖20g、蛋白胨20g、酵母浸膏10g、琼脂20g，用蒸馏水溶解、定容至1000mL，用高压锅在121℃灭菌20min-30min，调pH至5.0~5.5，制得培养基，然后将啤酒酵母和产朊假丝酵母从冰箱取出复苏，培养于该培养基上24h，以获得复活的啤酒酵母和产朊假丝酵母；

（2）基础液体培养基与锰梯度培养基制备

基础液体培养基的制法为：依次向1000ml蒸馏水中加入葡萄糖20g、蛋白胨20g以及酵母浸膏10g，并搅拌混匀，调整pH至5.0~5.2，备用；

锰梯度培养基的制法为：在上述基础液体培养基中加入可溶解在稀酸溶液中的无机锰化合物，得到锰含量分别为50mg/L、100mg/L、200mg/L、400mg/L、600mg/L、800mg/L和1000mg/L的培养基，并与锰含量为0mg/L的基础液体培养基构成锰梯度培养基，备用；

（3）微生物梯度培养

将步骤（1）处理所获得的啤酒酵母和产朊假丝酵母分别依次培养于步骤（2）所制得锰梯度培养基中，培养时间为24h，培养温度为30.5℃；

（4）种子培养基的制备

获取啤酒生产过程中新鲜的糖化废液，在4000r/min转速下离心5~10min，然后按照重量比添加3.5%的蔗糖、0.3%的尿素、0.25%的食盐、0.02%的硫化钠，混匀后121℃灭菌15~20min，并调pH至5.0~5.5，即制成种子培养基，并将其平均分做两份，备用；

（5）发酵种子的制备