[发明专利]利用PCR技术鉴定红木中阔叶黄檀的方法、引物和探针有效
| 申请号： | 201510518654.8 | 申请日： | 2015-08-21 |
| 公开（公告）号： | CN105132542B | 公开（公告）日： | 2018-07-20 |
| 发明（设计）人： | 张明哲;朱晓雨;徐莉莉;尹文秀;林晓佳;陈吴健 | 申请（专利权）人： | 浙江出入境检验检疫局检验检疫技术中心 |
| 主分类号： | C12Q1/6895 | 分类号： | C12Q1/6895;C12N15/11 |
| 代理公司： | 杭州千克知识产权代理有限公司 33246 | 代理人： | 黎双华 |
| 地址： | 310002 浙*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 利用 pcr 技术 鉴定 红木 阔叶 黄檀 方法 引物 探针 | ||
1.用于红木中阔叶黄檀的PCR鉴定用的引物、探针，其特征在于，所述引物和探针序列包括：
KYHT Primer-F：5'-GTGGATTCAGCGCCATGAC-3'
KYHT Primer-R：5'-GGTCGCGCGCATGACT-3'
KYHT Primer Probe：5'-VIC-TTGAGCATCTCCTC-MGB-3'。
2.如权利要求1所述的引物和探针，其特征在于，还包括检测植物內源基因tRNALeu的引物和探针，所述序列分别为：
tRNALeu-F：5'-CGAAATCGGTAGACGCTACG-3'
tRNALeu-R：5'-TTCCATTGAGTCTCTGCACCT-3'
tRNALeu Probe：5'-FAM-GCAATCCTGAGCCAAATCC-TAMRA-3。
3.如权利要求1所述的引物和探针，其特征在于，所述引物和探针的使用浓度比为：KYHT Primer-F:KYHT Primer-R:KYHT Primer Probe＝1:1:2。
4.阔叶黄檀的PCR鉴定方法，包括如下步骤：
(1)木材样本的预处理；
(2)提取经(1)处理后的木材样本中的DNA；
(3)利用引物KYHT Primer-F和KYHT Primer-R，以及探针KYHT Primer Probe对(2)中提取的DNA进行荧光PCR扩增；
(4)木材种类的确定；
其特征在于，所述引物和探针序列包括：
KYHT Primer-F：5'-GTGGATTCAGCGCCATGAC-3'
KYHT Primer-R：5'-GGTCGCGCGCATGACT-3'
KYHT Primer Probe：5'-VIC-TTGAGCATCTCCTC-MGB-3'。
5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述的荧光PCR扩增条件为：95℃，2min；95℃15s，55℃ 34s，共40个循环。
6.如权利要求4所述的方法，其特征在于，还包括检测植物內源基因tRNALeu的引物和探针，所述序列分别为：
tRNALeu-F：5'-CGAAATCGGTAGACGCTACG-3'
tRNALeu-R：5'-TTCCATTGAGTCTCTGCACCT-3'
tRNALeu Probe：5'-FAM-GCAATCCTGAGCCAAATCC-TAMRA-3。
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