[发明专利]脐带间充质干细胞无血清保存液及其应用

说明书

技术领域

本发明属于细胞保存液技术领域，具体涉及一种脐带间充质干细胞无血清保存液及其应用。

背景技术

UC-MSCs(脐带间充质干细胞)已广泛应用于细胞移植替代治疗，而移植和替代治疗中细胞的活性与细胞质量是治疗成功的关键。脐带间充质干细胞培养之后，直至抑制手术和操作之前，都是采用临床常用细胞保存液对UC-MSCs进行短期保存。其中，在细胞的保存过程中，为了保证细胞能持续维持细胞代谢以及避免其他各方面伤害等等，在保存液中都添加有血清作为细胞保护成分。

而经过反复的研究和跟踪，由于血清中存在许多未知的成分，包括生长抑制因子、毒性因子，以及其他的大分子蛋白等等；虽然这些成分之间相互中和，最终细胞的性状保存后变化较低，但是中间生长抑制因子和毒性因子等多种物质作用于细胞使细胞所产生的应激反应，并不能当成是没发生过，而这些中间过程可能包含有氧化应激水平的增高、能量代谢会失衡、ATP水平快速下降等等，这些都会引起细胞活性与质量的明显下降，最终导致在移植和替代治疗之后不与损伤组织融合并且一段时间之后死亡，影响了治疗效果。

发明内容

本发明实施的目的在于克服现有的缺陷，提供一种对移植备用的细胞起到保护作用，可以长效保持移植细胞的活性与质量，提髙移植细胞治疗的临床效果的脐带间充质干细胞无血清保存液。

为了实现上述发明目的，本发明实施例的技术方案如下：

一种脐带间充质干细胞无血清保存液，包括NaCl质量分数为0.85～0.92％的生理盐水，所述生理盐水中还添加有胰岛素、雌激素和孕激素、氢化可的松、亚硒酸钠、腺苷、N-乙酰半胱氨酸和L-谷氨酰胺。

在上述保存液的基础上，本发明还提出将上述保存液用于细胞移植替代治疗中对脐带间充质干细胞进行保存的应用。

相比现有技术的血清保存液，本发明的保存液，尽量减低能够产生多种成分的毒素伤害的物质来源。采用比较成分较少的功能成分，维系细胞的基本代谢，使其性能比较平缓，无巨大的变动；这些成分基本又能提供作为一些基本的活性营养物质和能量物质，以维持较低的代谢水平，使细胞活性处于较稳定的状态，避免了生长和培养导致的形状变异或者分化等情形，对细胞起到保护作用，可以长效保持移植细胞的活性与质量，提髙移植细胞治疗的临床效果。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

本发明实例提出一种脐带间充质干细胞无血清保存液，采用注射用生理盐水作为基础(NaCl的质量分数为0.85～0.92％)，在其中添加胰岛素、雌激素和孕激素、氢化可的松、亚硒酸钠、腺苷、N-乙酰半胱氨酸、以及L-谷氨酰胺。

L-谷氨酰胺(L-glutamine)在氨基酸组分中的有重要作用，谷氨酰胺可以合成核酸和蛋白质，是细胞生长必需成分，而谷氨酷胺缺乏会使细胞生长不良甚至导致细胞死亡。所以本发明在保存液中添加一定浓度的L-谷氨酰胺，在保存中满足细胞基本代谢所需的谷氨酷胺，维持代谢活动处于相对较低的水平，避免胁迫式的进行大量代谢，反而会大大缩短组织细胞的寿命和活性。同时，本发明中添加L-谷氨酰胺的目的还在于，其在机体内能参与消化道黏膜黏蛋白构成成分氨基葡萄糖的生物合成，从而促进黏膜上皮组织的修复；跟踪用于体外之后其可以有助于细胞膜结构的补充和修复功能，避免细胞的裂解死亡；所以在本发明保存液中使用还能借助其进行细胞的修复功能。

而本发明上述亚硒酸钠和N-乙酰半胱氨酸消除保存能引起细胞活性降低或者死亡的细胞毒素。其中，亚硒酸钠含有的微量元素硒参与谷胱甘肽过氧化物酶和过氧化物歧化酶的作用过程，可以促进氢过氧化物代谢，消除氧化物酶和氧自由基对细胞的伤害，这一点上对干细胞具有良好的损伤保护作用。相比血清中通过较多天然成分自身相互中和细胞毒素保护细胞的不同，上述保存液是尽量减低能够产生多种成分的毒素伤害的物质来源，并且同时消除过氧化氢的伤害，因为是细胞生长和克隆的主要毒性物质，可由培养基中的酪氨酸、色氨酸、核黄素、抗坏血酸盐等产生，引起细胞膜上的饱和脂肪酸、细胞蛋白质氧化和DNA损伤而导致细胞死亡。而N-乙酰半胱氨酸是活性氧自由基的清除剂，它可以改善氧化应激引起的不同种类细胞的损伤；对亚硒酸钠的所减缓之外的其他的氧化损伤等进行弥补，保证细胞温和的保存环境。