[发明专利]一种基于心跳指标的快速评估扇贝抗性的方法

说明书

技术领域

本发明属于海洋生物品种筛选技术领域，具体涉及一种基于心跳指标的快速评估扇贝抗性的方法。

背景技术

动物的心跳与机体自身的体质、活动、外界的环境变化等因素息息相关，是表征生物机体抗性状况的重要指标。心率一般是指动物在静息状态下，每分钟心跳的次数；心跳波形反映了心脏兴奋的产生、传导和恢复过程。扇贝的心脏包括一个心室、两个心耳；有研究表明，扇贝的心跳变化与周围自然环境的影响显著相关，是一种合理的、准确的、有巨大发展潜力的生物监测指标，因此扇贝的心跳频率和波形能够反应机体的健康状况，可以作为评估扇贝抗性的指标。

双壳贝类和甲壳类都是我国重要的海洋经济养殖种类，其营养丰富，经济价值高，深受国内外消费者的喜爱。双壳贝类和甲壳类养殖历史悠久，养殖成本低，在我国具有开展养殖的优越条件。作为双壳贝类重要代表品种的扇贝养殖潜力巨大，掀起了海洋水产养殖的第三次浪潮。我国的扇贝养殖品种主要包括栉孔扇贝(Chlamysfarreri)、虾夷扇贝(Patinopectenyessoensis)、海湾扇贝(Argopectenirradias)，华贵栉孔扇贝(Chlamysnobilis)等，自然分布在黄渤海、东海、南海等各大海区。

近年来我国扇贝养殖业出现种质衰退、养殖病害频发等问题，连续出现养殖扇贝抗性降低，导致扇贝病害频发和大规模死亡，造成巨大的经济损失，严重挫伤了扇贝养殖业的积极性。研究表明，在养殖过程中，扇贝会受到温度、盐度、溶氧量、饵料、细菌、病毒等因素的影响，不同遗传背景的同种扇贝在生长过程中会显示出不同的生理抗性，机体对环境变化、自然病害的抵抗力具有差异性。抗性降低、病害频发已成为扇贝养殖业亟待解决的问题，因此选择抗性高的扇贝品系成为扇贝良种培育的重要方向，但迄今为止扇贝中尚未建立快速、准确、高效的评估抗性的方法。

现阶段，扇贝选种的方法更多地关注于壳高、壳长、壳宽、体重、软组织重等生长性状以及扇贝各组织器官的酶活、组分含量等分子指标。这些研究虽然能够从个体水平、细胞水平甚至分子水平(抗氧化能力、机体能量代谢水平)等不同角度在不同程度上指示扇贝的抗性指标。但是上述的方法实验周期长、通量低，较难实现实时实地快速测定，而且细胞、分子水平的检测需要活体采样，某种程度上会导致育种候选个体/群体损伤甚至死亡，无法很好的保证其活性作为后续育种和传代的亲本。因此，提供一种具有操作简便、测定迅速、活体检测、实时实地监测的扇贝选种方法就成为扇贝育种的研究热点之一。

发明内容

本发明的目的是建立一种基于心跳指标的快速评估扇贝抗性的方法，利用扇贝心跳频率和波形作为活力指标对扇贝进行快速选种。在不伤害育种参考个体/群体机体活性的基础上，实现心跳活力指标的红外感应无损伤检测，以弥补现有技术的不足，解决现阶段海产经济贝类养殖过程中缺少快速、准确、高效、活体检测的快速评估扇贝抗性的问题，从而使心跳作为性状/活力指标，就如同壳高、壳长、壳宽、体重等体尺性状，应用于扇贝的抗性评估工作中。

本发明通过对扇贝的心跳频率和波形进行检测，同时结合相应扇贝个体温度胁迫下耐受时间的测定，建立一种海产经济养殖扇贝快速评估抗性的新方法，为养殖扇贝抗性评估提供可靠的技术手段。

本发明提供一种基于心跳指标的快速评估扇贝抗性的方法，包括如下的步骤：

1)将待检测的扇贝个体首先培养5-7天使其适应检测环境；

2)将InfraredSensors的红外感端粘附到扇贝壳外靠近心脏的位置；

3)检测之前10分钟，将扇贝放到同样温度的充气的水体环境中，待外套膜触须充分伸展之后进行检测；

4)实验数据的采集：

A、心率的检测：

截取扇贝心跳波形图中波形稳定的区域，图像中能够明区分扇贝两个心耳的波形和一个心室的波形；信号的强度在1.45-1.95V之间；

B、心跳波形峰高的检测：

计算10分钟检测时间内所有稳定波形的频率，计算10分钟检测时间内所有稳定波形的平均峰高；

5)数据分析